商品介紹:
Cobimetinib hemifumarate是一種有效的具有選擇性的MEK抑制劑,能夠抑制MEK1的活性,IC50值為4.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1369665-02-0 別名:GDC-0973 hemifumarate;XL-518 hemifumarate 純度:99.27% 分子量:647.38 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
禾谷Candida guilliermondii
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型Saccharomyces cerevisiae
解糖鹽球菌Saccharomyces cerevisiae
生根根瘤菌Saccharomyces sp.
熱帶假絲酵母Saccharomyces cerevisiae
香菇Candida tropicalis
球毛殼Candida sp.
嗜熱脂肪地芽胞桿菌Candida krusei
球形芽孢桿菌Hansenula anomala
波茨坦短芽孢桿菌Candida krusei
爪哇漏斗狀側(cè)耳(鳳尾菇)Pichia anomala
耐寒短桿菌Saccharomyces cerevisiae
斐濟(jì)球腔菌Pichia subpelliculosa
釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae
根瘤菌Saccharomyces cerevisiae
無二檸檬桿菌Saccharomyces cerevisiae
小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫試劑盒核突觸蛋白β抗體人類嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)
小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)免疫試劑盒BTRC2蛋白抗體人類嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)山柰-3-O-蕓香糖苷
小鼠β1腎上腺能受體(β1AR)抗體免疫試劑盒BEND3蛋白抗體人麻疹病(MV)山羊豆堿
小鼠α羥基丁脫氫(αHBDH)免疫試劑盒BEND4蛋白抗體人麻疹病(MV)山楂
MEK抑制劑(Cobimetinib hemifumarate)ZNF717 英文名稱: 鋅指蛋白717抗體 0.2ml
DBX1 英文名稱: 腦發(fā)育同源蛋白1抗體 0.2ml
肝再生增強(qiáng)因子抗體 Anti-ALR 0.1ml
Anti-XIAP/FITC 熒光素標(biāo)記X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FAK(Tyr407) 磷酸化粘著斑激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
CX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg