以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
YHO-13351(free base)是YHO-13177的水溶性前體藥物,YHO-13177是腺癌耐藥蛋白多藥轉(zhuǎn)運(yùn)通道(BCRP)高效特異性抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:912288-64-3 分子量:483.62 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
小鼠組織蛋白酶A(CTSA)ELISA試劑盒 ,英文名: CTSA ELISA Kit
山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA檢測試劑盒Goatgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit 96T/48T
犬胰島素(INS)免疫試劑盒 Dog Insulin,INS ELISA Kit
英文名稱Mouse8-iso-ProstaglandinF2a小鼠8-異前列腺素F2α規(guī)格:96T/48T
部分蛋白酶切多肽譜分析試劑盒10次
RatFollistatin,FSELISA試劑盒大鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素28A(IL-28A)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-28A ELISA Kit
大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA檢測試劑盒RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit 96T/48T
人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫試劑盒 Human TLR9 ELISA kit
英文名稱MouseNervegrowthfactor,NGFELISAkit小鼠神經(jīng)生長因子(NGF)規(guī)格:96T/48T
TNFBETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次
Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISA試劑盒兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒
Rabbitniicoxidesyhase,NOSELISAKit 兔一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAP(HumanAprotinin)ELISAKit人抑肽酶規(guī)格:48T/96T
血清樣品液相法去內(nèi)毒素試劑盒20次
PorcineIerleukin12,IL-12/P40ELISAKit豬白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
BCRP抑制劑(YHO-13351 free base)SKP2 英文名稱: 細(xì)胞S期激酶相關(guān)蛋白2抗體 0.1ml
EBP1 英文名稱: erbB3結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
臂板蛋白3F抗體 Anti-Sema3F 0.2ml
Anti-TBX2/T-box2/FITC 熒光素標(biāo)記新型抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser387) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml
Integrin Beta chain (ITG- Beta3/ITGB3) 整合素-β3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg