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8色譜柱沖洗&預(yù)平衡
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微流電動(dòng)液相色譜系統(tǒng)-質(zhì)譜法在線富集蛋白質(zhì)
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上海通微分析技術(shù)有限公司
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毛細(xì)管電色譜(CEC)結(jié)合了液相色譜(HPLC)和毛細(xì)管電泳(CE)的優(yōu)點(diǎn)，保留了它們的分離機(jī)制，實(shí)現(xiàn)了高選擇性和率，并具有普遍的適用性和良好的樣品裝載能力。因此，它有可能成為分離復(fù)雜混合物的強(qiáng)大工具。 然而，CEC 的發(fā)展受到各種困難的限制，特別是色譜柱中氣泡的形成。為解決這一問題，常用低離子強(qiáng)度的緩沖劑來降低焦耳熱。此外，還可以在色譜柱上施加補(bǔ)充壓力，稱為微流電動(dòng)液相色譜(eHPLC)。在 eHPLC 系統(tǒng)中，對(duì)色譜柱施加的壓力抑制了氣泡形成?？梢酝ㄟ^旋轉(zhuǎn)式進(jìn)樣器實(shí)現(xiàn) eHPLC 中樣品的定量注入。電滲流(EOF)可以與壓力流方向相同，也可以與壓力流方向相反，由此可以控制樣品的洗脫順序。更重要的是，eHPLC 與 HPLC 相同，可以改變流動(dòng)相的比例，設(shè)置溶劑梯度洗脫模式。
盡管紫外檢測器通常用于 CEC，但質(zhì)譜(MS)是一種強(qiáng)大的檢測工具，特別是在生化應(yīng)用過程中，可為各種樣品提供高靈敏度和可靠的檢測。此外，它還能夠提供許多有關(guān)分析物結(jié)構(gòu)和特性的信息。迄今為止，eHPLC-MS 已成功應(yīng)用于肽、麥角菌粗提物和對(duì)映體的分析。然而，檢測靈敏度相對(duì)較低仍然是嚴(yán)重的問題之一，特別是對(duì)于蛋白質(zhì)的分析。因此，有必要開發(fā)一種蛋白質(zhì)的在線富集技術(shù)。
我們以細(xì)胞色素 C、溶菌酶、胰島素為檢測樣品，開發(fā)了一種可用于低濃度蛋白質(zhì)樣品的分析方法。并且與常規(guī)進(jìn)樣相比，此方法檢測靈敏度有了明顯的提高。