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8色譜柱沖洗&預(yù)平衡
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基于高效微流電動(dòng)液相色譜系統(tǒng)分離檢測(cè)強(qiáng)陽(yáng)離子交換親水性多肽
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上海通微分析技術(shù)有限公司
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1. 背景介紹
毛細(xì)管電色譜（CEC）是一種集高效液相色譜（HPLC）的高選擇性和高效毛細(xì)管電泳 （CE）為一體的小型液相色譜技術(shù)。自 1974 年第一次報(bào)道 CEC 以來(lái)，隨著理論和應(yīng)用的 發(fā)展，CEC 已成為一種強(qiáng)大的分離技術(shù)。然而，這種技術(shù)的發(fā)展速度受到了實(shí)際問(wèn)題和困難的阻礙，主要包括色譜柱的制造，再生和儀器有關(guān)。在“純”CEC 中，由于焦耳加熱，經(jīng)常遇到形成氣泡和干涸的問(wèn)題。并且因其沒(méi)有注射閥，難以實(shí)現(xiàn)樣品的定量注射。
為了減少氣泡的形成，HPLC 泵已經(jīng)與 CEC 系統(tǒng)相耦合，終形成一種被稱(chēng)為高效微 流電動(dòng)液相色譜系統(tǒng)（eHPLC）的混合技術(shù)。在這種新穎的分離技術(shù)中，壓力和電場(chǎng)都可以施加在填充的毛細(xì)管色譜柱上，有利于中性和帶電物質(zhì)的分離。 此外，eHPLC 可實(shí)現(xiàn)溶劑的梯度洗脫和定量注射。
我們研制的eHPLC系統(tǒng)，可用于高效微流電動(dòng)液相色譜、微流液相和毛細(xì)管電泳等實(shí)驗(yàn)。并研究了 eHPLC 在親水性和強(qiáng)離子交換混合模式下多肽的分離。對(duì)于多肽等帶電物質(zhì)，eHPLC 模式下的保留機(jī)制是基于色譜分離和電泳遷移。因此，可以通過(guò)改變電場(chǎng)和壓力來(lái)調(diào)節(jié)多肽的洗脫。并且我們?cè)u(píng)價(jià)了親水性相互作用、離子交換和電遷移對(duì)多肽分離的貢獻(xiàn)，并討論了保留機(jī)制。用梯度洗脫法分離 eHPLC 系統(tǒng)中的多肽，研究了壓力、電場(chǎng)、有機(jī)溶劑、pH 值、離子強(qiáng)度等因素對(duì)多肽混合物分離的影響。
2.測(cè)試條件
3.測(cè)試結(jié)果Application Note
4.結(jié)論
采用 TriSep ®-3000 高效微流電動(dòng)液相色譜系統(tǒng)，可以通過(guò)改變外加電壓和壓力來(lái)調(diào)節(jié)多肽等帶電化合物的選擇性，克服了純 CEC 中形成氣泡的問(wèn)題。系統(tǒng)的研究了壓力、電 場(chǎng)、有機(jī)溶劑、pH 值、離子強(qiáng)度等因素對(duì)多肽混合物分離的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高效微流電動(dòng)液相色譜系統(tǒng)，可方便地進(jìn)行連續(xù)梯度洗脫，并可通過(guò)液相型注射閥實(shí)現(xiàn)定量注射。并且是分離親水性多肽的一種有效方式。
5.配置列表
