大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分：

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。

1）復(fù)蘇大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意無菌操作，避免污染。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時(shí)間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。

5.本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用，不可應(yīng)用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后，可能會(huì)有少量絮狀物析出，不影響大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞正常使用。