大鼠大隱靜脈平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞 Anglne(人癌細(xì)胞) 顆粒細(xì)胞 COLO320/DM 人結(jié)腸癌細(xì)胞 kasumi-1, 人白血病細(xì)胞株 Human 小鼠原代胰腺腺泡細(xì)胞

本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠大隱靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠大隱靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠大隱靜脈平滑肌細(xì)胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點(diǎn)稱(chēng)為隱股點(diǎn)。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時(shí)，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①血管平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)潛力是原發(fā)血管病發(fā)的重要異常因素；②參與血管壁的炎癥反應(yīng)，并與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。因此，研究大隱靜脈平滑肌細(xì)胞的代謝和信號(hào)通路是研究大隱靜脈擴(kuò)張等疾病的良好實(shí)驗(yàn)材料。大隱靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF試劑盒豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠催產(chǎn)素(OT)試劑盒 ，英文名： OT ELISA Kit

Human poly serum protein (PHSA) ELISA Kit 人多聚血清蛋白(PHSA)試劑盒

rabbitprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta-LPH(HumanBeta-lipoopichormone)ELISAKit人β-促脂素

細(xì)菌細(xì)胞趨化作用(chemotaxis)軟瓊脂試劑盒10次

rabbitImmunoglobulinA,IgAELISAKit兔子免疫球蛋白A(IgA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人周期素依賴(lài)性激酶5試劑盒   人周期素依賴(lài)性激酶5試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人周期素依賴(lài)性激酶5試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴(lài)性激酶5試劑盒、人周期素依賴(lài)性激酶5 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人周期素依賴(lài)性激酶4試劑盒   人周期素依賴(lài)性激酶4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人周期素依賴(lài)性激酶4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴(lài)性激酶4試劑盒、人周期素依賴(lài)性激酶4 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人周期素依賴(lài)性激酶2試劑盒   人周期素依賴(lài)性激酶2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人周期素依賴(lài)性激酶2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴(lài)性激酶2試劑盒、人周期素依賴(lài)性激酶2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人周期素依賴(lài)性激酶1試劑盒   人周期素依賴(lài)性激酶1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人周期素依賴(lài)性激酶1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴(lài)性激酶1試劑盒、人周期素依賴(lài)性激酶1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SDF-1/CXCL12 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1 0.5mgSDF-1/CXCL12 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AMBP Protein Human 重組人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL1RAPL2 Protein Human 重組人 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白

A549/DDP細(xì)胞，耐DDP肺癌細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞,CHL細(xì)胞 CM-M002小鼠肺血管平滑肌細(xì)胞SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細(xì)胞裂解液   U251細(xì)胞，膠質(zhì)瘤細(xì)胞 鼠成纖維細(xì)胞系 豬原代膀胱上皮細(xì)胞 大鼠原代腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞

大鼠大隱靜脈平滑肌原代細(xì)胞RNA結(jié)合基元蛋白20(RBM20)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

PLK1重組小鼠 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

IL12A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IZUMO1重組人 IZUMO1 蛋白 Protein