大鼠浦肯野原代細胞

大鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質(zhì)組織；小腦的表面被覆著一層灰質(zhì)，叫小腦皮質(zhì)，小腦皮質(zhì)分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質(zhì)里含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的能夠傳出沖動的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導性強，傳導速度快，可達4000mm/s。屬快反應自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結(jié)P細胞。這類細胞常常平行排列，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質(zhì)中最大的神經(jīng)元，細胞體呈梨形，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與主樹突相對方向）發(fā)出，細長，離開胞體不遠便形成有髓神經(jīng)纖維，向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進入白質(zhì)，組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大，約與小腦深部核團的35個神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束，小束外包繞著基底膜。細胞內(nèi)含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng)，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內(nèi)無橫管系統(tǒng)，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構(gòu)成浦肯野細胞傳導快的形態(tài)學基礎。

產(chǎn)品名稱：大鼠浦肯野細胞

組織來源：小腦組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠浦肯野采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠浦肯野經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

人粘蛋白3(MUC3)ELISA 試劑盒

Human tumor necrosis factor soluble receptor I (TNFsR- I) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒

HumanHistoneDeacetylase,HDELISAKit 人組織蛋白去乙?；?span>(HD)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAP試劑盒人免疫抑制酸性蛋白(IAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)活性比色法定量試劑盒20次

Humanleukemiainhibitoryfactorreceptor，LIFRELISAKit人白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)試劑盒

HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4試劑盒人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織GRK5激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發(fā)性肌硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脂多糖試劑盒   人脂多糖試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖試劑盒、人脂多糖試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒、人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

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人脂蛋脂酶A2試劑盒   人脂蛋脂酶A2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋脂酶A2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋脂酶A2試劑盒、人脂蛋脂酶A2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

FCGRT & B2M重組食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13 0.5mgMMP-13 (Matrix metalloproteinase 13) 基質(zhì)金屬蛋白酶13抗原

CLIC4重組人 CLIC4 蛋白 Protein

JAM3 Protein Human 重組人 JAM3 / JAM-C 蛋白

SEMA5A Protein Mouse 重組小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白

CL187/CCL187細胞，人大腸癌細胞 人黑色素瘤細胞,M14細胞 人多發(fā)性骨髓瘤細胞;RPMI-8226 [RPMI8826]  LRRTM4 Others Human 人 LRRTM4 人細胞裂解液   293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細胞系 小鼠原B細胞 小鼠原代室管膜細胞 人原代脂肪血管基質(zhì)細胞

大鼠浦肯野原代細胞Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein