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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸嵴干采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸嵴干經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠腸神經(jīng)嵴干原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腸組織 |
英文名稱 | Mouse Intestinal Neural Crest Stem Cells | 貨號 | YS-01X7637 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠腸嵴干細(xì)胞分離腸組織；嵴干細(xì)胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周系統(tǒng)干細(xì)胞，起源于胚胎期的管背側(cè)，與中樞系統(tǒng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有著顯著不同，NCSC可表達(dá)低親和力營養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細(xì)胞，而中樞系統(tǒng)干細(xì)胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如元、膠質(zhì)、黑色素細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸系統(tǒng)中元和膠質(zhì)的NCSC，被稱為腸嵴干細(xì)胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 球形
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
兔間變表皮鱗癌瘤株;VX2 | 分化相關(guān)基因2蛋白/立即早期反應(yīng)蛋白抗體 |
PSF2蛋白抗體 | 鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關(guān)蛋白抗體 |
酸化成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體 | 酸激酶-M2 |
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶樣3抗體 | 酸化DDX58抗體 |
1號染色體開放閱讀框43抗體 | 3-羥氨苯甲酸雙加氧酶抗體 |
人前列腺上皮細(xì)胞(HPEpiC)(5×105) | CNE-2Z(人鼻咽癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 原代心肌細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml |
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHIMEC cDNA | PLAUR Others Human 人 uPAR / CD87 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Calu-3(人肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0062CHO-K1(倉鼠卵巢細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2 正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R005大鼠氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠腸神經(jīng)嵴干原代細(xì)胞酸激酶-M2 |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H446 大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 貓腎細(xì)胞;F81 |
mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞 Mouse | TOV-112D細(xì)胞，人上皮性卵巢癌細(xì)胞 人腎小管近段上皮細(xì)胞,HK-2細(xì)胞 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
CD6 Others Mouse 小鼠 CD6 / TP120 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體 |
溶酶體蛋白跨膜β4抗體 | 人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2 人直腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
骨形態(tài)發(fā)生蛋白15抗體 | 活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體 |
β半乳糖苷酶抗體 | 人前列腺上皮細(xì)胞(HPEpiC)(5×105) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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