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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠骨采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠骨經(jīng)骨鈣素免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠骨原代細胞 | 組織來源 | 骨組織 |
英文名稱 | Mouse Osteocyte Cells | 貨號 | YS-01X7639 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠骨細胞分離自骨組織；骨組織的細胞成分包括骨原細胞、成骨細胞、骨細胞和破骨細胞。只有骨細胞存在于骨組織內(nèi)，其他三種細胞均位于骨組織的邊緣。骨細胞（Osteocyte）是人體骨骼中主要的細胞成分。在成年人骨骼中，骨細胞占細胞總數(shù)量的90%～95%，大約是成骨細胞數(shù)量的20倍。骨細胞生長在骨骼內(nèi)部的骨基質(zhì)中。骨細胞的細胞體呈梭形或類圓形，位于基質(zhì)構(gòu)成的骨陷窩內(nèi)。與細胞類似，每個骨細胞具有大量向外延伸的突觸，而這些突觸均位于由骨基質(zhì)構(gòu)成的骨小管結(jié)構(gòu)中。通過這些突觸，骨細胞能夠與骨表面的細胞、周圍其它的骨細胞進行“交流"。普遍認為，骨細胞起源于成骨細胞。在骨形成的終末階段，成骨細胞將可能有3種不同的歸宿：分化成為骨細胞、轉(zhuǎn)移至骨表面成為暫不活動的成骨細胞、進入程序死亡過程（凋亡）。骨細胞為扁橢圓形多突起的細胞，核亦扁圓、染色深。胞質(zhì)弱嗜堿性。電鏡下，胞質(zhì)內(nèi)有少量溶酶體、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體亦不發(fā)達。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接。在骨基質(zhì)中，骨細胞胞體所占據(jù)的橢圓形小腔，稱為骨陷窩，其突起所在的空間稱骨小管。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連。骨陷窩和骨小管內(nèi)均含有組織液，骨細胞從中獲得養(yǎng)分。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
視網(wǎng)膜muller細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 細胞間粘附分子-2抗體 |
叢蛋白A4抗體 | 成簇相關(guān)蛋白1抗體 |
甲精結(jié)合蛋白17抗體 | 原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 |
1號染色體開放閱讀框147抗體 | 多巴胺受體D2抗體 |
1號染色體開放閱讀框146抗體 | 同源盒蛋白HOXA9抗體 |
CD96 Others Human 人 CD96 人細胞裂解液 (陽性對照) | FOLR1 Others Mouse 小鼠 FOLR1 / FR-alpha 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人癌細胞;MDA-MB-453 | 人淋巴內(nèi)皮細胞 (HLEC)( 5×105 ) |
PIGR Others Human 人 PIGR 人細胞裂解液 (陽性對照) | TACSTD2 Others Mouse 小鼠 OP2 / TACSTD2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
PVR Others Rat 大鼠 PVR / CD155 / NECL5 人細胞裂解液 (陽性對照) | HVMF Pellet 人類絨毛間質(zhì)成纖維細胞團塊 > 1 mio.cells 人腦血管平滑肌細胞裂解物HBVSMCL |
CM-M047小鼠腸微血管細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠骨原代細胞原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 |
SFTPD Others Mouse 小鼠 SFTPD 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大耳山羊腎細胞;LDG-2 |
CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽) | 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-6 羊膜細胞，WISH細胞 786-O [786-0](腎透明細胞腺癌細胞) |
CPM Others Mouse 小鼠 Carboxypeptidase M / CPM 人細胞裂解液 (陽性對照) | 鉀通道相互作用蛋白3抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 | FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Bcl-10抗體 | 指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體 |
顆粒溶素抗體 | CD96 Others Human 人 CD96 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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