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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠骺軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化并軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠骺軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠骺軟骨原代細胞 | 組織來源 | 生長板組織 |
英文名稱 | Mouse Epiphyseal Chondrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7531 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠骺軟骨細胞分離自骨骺生長板；骨骺生長板位于長骨兩端骨骺和骨干之間的軟骨組織，其中的骺軟骨細胞可分裂、成熟、肥大，終被骨組織所替換，對于長骨生長具有重要作用。幼稚的骺軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行，越向深層的骺軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形，染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的骺軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些骺軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，骺軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，骺軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的骺軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
食管癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | 胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體 |
血小板源性生長因子C抗體 | 毛細管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 |
FAHD1蛋白抗體 | 乳腺上皮細胞抗原BA46抗體 |
嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL6抗體 | 雙皮質(zhì)素抗體 |
1號染色體開放閱讀框129抗體 | H5亞型全病毒抗體 |
GP140 Others HIV 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人細胞裂解液 (陽性對照) | 人羊膜上皮細胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細胞 Mouse |
人癌細胞;MCF7 | 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HVVEC)( 5×105 ) |
hMNC-PB pooled Pellet 人類外周血單核細胞團塊混合來源，超 > 1 mio.cells 人臍帶間充質(zhì)干細胞總RNAHUMSC NA | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
人腦瘤細胞;SF763 大鼠頜下腺上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CM-M034小鼠肝動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠骺軟骨原代細胞乳腺上皮細胞抗原BA46抗體 |
HuT 78(人T淋巴細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 阪崎腸桿菌 | CL-0461UACC-812(人導管瘤細胞)5×106cells/瓶×2 |
NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系 Mouse | C127小鼠細胞 C127 mouse mammary tumor cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS |
RNASET2 Others Human 人 RNASET2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | 酸化細胞分裂相關蛋白CSTF64抗體 |
LRRC23蛋白抗體 | PDCD1LG2 Others Human 人 PD-L2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
酸化乳腺癌易感基因1抗體(人) | 腫瘤Nova1抗原抗體 |
GTP酶IMAP家族成員5抗體 | GP140 Others HIV 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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