小鼠頸動脈血管平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代皮層元細(xì)胞 293E(人胚細(xì)胞（EBNA1基因修飾）) RPMI-8226/IL21 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞（白介素21基因修飾） 1ml/T75 L1210 小鼠白血病細(xì)胞 REM 大鼠胚胎肌肉成纖維樣細(xì)胞 人原代結(jié)腸癌組織源細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的小鼠頸動脈血管平滑肌采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的小鼠頸動脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

小鼠頸動脈平滑肌細(xì)胞分離自頸動脈組織；頸動脈存在于脊椎動物頸部的動脈。有頸外動脈和頸內(nèi)動脈。前者分布至頭頂部和顏面部。后者進(jìn)入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。在發(fā)生時，鰓弓中不形成鰓的下頜弓，所以，從大動脈也不分入鰓動脈和出鰓動脈。從腹大動脈的前方發(fā)出頸外動脈，頸內(nèi)動脈是通向第三鰓弓的血管延伸而形成的，但在某些魚類、有尾兩棲類和爬行類中，這一血管也將一些血液送至大動脈根。其它的高等脊椎動物的大動脈根，在第三、第四大動脈弓之間消失，所以，其第三大動脈弓形成純粹的頸動脈。在相當(dāng)于第三、第四大動脈弓之間的腹行大動脈的部分稱為頸總動脈干（common co-rotid trunk）；高等脊椎動物，是由頸總動脈干分為左、右頸總動脈，然后再各分支為頸外動脈和頸內(nèi)動脈。頸動脈是將血液由心臟輸送至頭、面、頸部的大血管，是腦的主要供血血管之一，由內(nèi)膜、平滑肌層及外膜層構(gòu)成。與其相關(guān)常見疾病為頸動脈狹窄，頸動脈狹窄導(dǎo)致的缺血癥狀主要包括，頭暈、記憶力、定向力減退、意識障礙、黑朦、偏側(cè)面部和/或肢體麻木和/或無力、伸舌偏向、言語不利、不能聽懂別人說的話等。研究頸動脈平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)，為研究治療頸動脈狹窄提供一個細(xì)胞模型具有重要意義。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠頸動脈血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。