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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的小鼠顱蓋造骨采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的小鼠顱蓋造骨經(jīng)ALP染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠顱蓋造骨原代細胞 | 組織來源 | 顱骨 |
英文名稱 | Mouse Calvarial Osteoblast Cells | 貨號 | YS-01X8511 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠顱蓋造骨細胞分離自顱骨組織；造骨細胞（osteoblast）亦稱成骨細胞。是參與骨組織形成的細胞。顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu)，構(gòu)成面部的支架，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細胞學(xué)基礎(chǔ)，也是藥物篩選、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠顱蓋造骨細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
腎動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 雞傳染性法氏囊病病毒抗體 |
酸化酪抗體 | 酸化鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶4抗體 |
胞外分泌型絲/蘇蛋白激酶FAM20C抗體 | 復(fù)合型表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 |
2號染色體開放閱讀框80抗體 | 脫氧尿三酸核苷水解酶抗體 |
軟骨相關(guān)蛋白CRTAP抗體 | 異質(zhì)核糖核蛋白F抗體 |
NP Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | INHBA Others Mouse 小鼠 Activin A 人細胞裂解液 (陽性對照) |
犬胸腺細胞;cf2Th | CD53 Others Mouse 小鼠 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
hMo-PB single 人類外周血單核細胞團塊單一來源，預(yù)選型 > 1 mio.cells 人表皮黑色素細胞-中色素RNAHEM-m miRNA5 μg | ADA Others Human 人 ADA / Adenosine deaminase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人細胞裂解液 (陽性對照) | 小型豬腎細胞;MPK 畸胎癌細胞，P19細胞 W256細胞，Walker氏癌肉瘤256瘤株 |
CM-M002小鼠肺血管平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠顱蓋造骨原代細胞復(fù)合型表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 |
敘利亞倉鼠皮膚細胞;GH-S1 貓腎細胞，CRFK細胞 Cyc-Tag(S49)細胞，小鼠T淋巴細胞瘤細胞 | 人腦瘤細胞;SF126 |
人脂肪細胞培養(yǎng)基 100mL | KLK1 Others Mouse 小鼠 KLK1 / Kallikrein 1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人前列腺成纖維細胞(HPrF)(5×105) 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞 Human | 11號染色體開放閱讀框21抗體 |
轉(zhuǎn)錄因子GATA3結(jié)合蛋白G3B抗體 | WB-F344細胞，大鼠肝上皮樣干細胞 HL-60(白血病原髓細胞) 大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3 |
成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體 | 軸突蛋白2抗體 |
一般受體酸肌醇相關(guān)支架蛋白1抗體 | NP Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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