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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞先用蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化結(jié)合專用培養(yǎng)基篩選法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的小鼠脈絡(luò)膜黑色素經(jīng)Dopa染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠脈絡(luò)膜黑色素原代細(xì)胞 | 組織來源 | 脈絡(luò)膜 |
英文名稱 | Mouse Choroidal Melanocyte Cells | 貨號 | YS-01X8515 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對整個視覺有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：長梭形
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
元細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml) | FBXL11蛋白抗體 |
核仁同源蛋白17抗體 | M鈣粘附分子抗體 |
富含亮跨膜纖連蛋白1抗體 | Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體 |
羧肽酶A2抗體 | 多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白DAT抗體 |
富含半蛋白2抗體 | 缺氧誘導(dǎo)因子3α/HIF-3α抗體 |
EPHB1 Others Human 人 EPHB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MA-782(小鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2) | THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人小腦顆粒細(xì)胞 (HCGC)( 5×105 ) 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) EC109，人食管癌細(xì)胞 | LAYN Others Cynomolgus 食蟹猴 Layilin / LAYN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
STIM1 Others Human 人 STIM1 / GOK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SRGN Others Human 人 Serglycin / SRGN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-H129人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠脈絡(luò)膜黑色素原代細(xì)胞Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體 |
TNFSF8 Others Rat 大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | DU 145(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人表皮角質(zhì)細(xì)胞RNAHEK miRNA5 μg | hMSC-UC Pellet 人類臍帶基質(zhì)中的間質(zhì)干細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人肺成纖維細(xì)胞總RNAHPF NA |
A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株 淋巴瘤細(xì)胞,U-937細(xì)胞 NCI-N87(人胃癌細(xì)胞) | 11號染色體開放閱讀框46抗體 |
離子通道蛋白Kv1.3抗體 | EPO Others Rat 大鼠 Erythropoietin / EPO 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
B淋巴細(xì)胞特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體 | 腦啡肽酶2抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體105抗體 | EPHB1 Others Human 人 EPHB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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