詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠皮膚肥大采用膠原酶-混合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠皮膚肥大經(jīng)MCG-35免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠皮膚肥大原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Mouse Skin Mast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7310 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠皮膚肥大細(xì)胞分離自皮膚組織;皮膚肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚微血管周圍,分泌多種細(xì)胞因子,參與免疫調(diào)節(jié)(T細(xì)胞、B細(xì)胞、APC細(xì)胞活化)。皮膚肥大細(xì)胞表達(dá)MHC分子、B7分子,具有APC功能。表達(dá)大量的IgE-Fc受體,釋放過敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能,和血液的嗜堿粒細(xì)胞同樣,具有強(qiáng)嗜堿性顆粒的組織細(xì)胞。存在于血液中的這類顆粒,含有肝素、組織胺、5-羥色胺,由細(xì)胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì),可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應(yīng)(炎癥)。由于在肥大細(xì)胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸,使細(xì)胞多陷于崩壞。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形,細(xì)胞核小,呈圓形或橢圓形,染色淺,位于細(xì)胞中央。細(xì)胞常成堆或單個(gè)分布于血管附近。細(xì)胞呈圓形或卵圓形,細(xì)胞質(zhì)中充滿大小一致、染成藍(lán)紫色的顆粒,均勻分布在核周圍。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 圓形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)基OPCM | 白介素1受體9抗體 |
三酸腺苷受體受體P2X3抗體 | 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2抗體 |
CD312抗體 | 顆粒細(xì)胞分化蛋白抗體 |
碳酸酶1抗體 | Duffy血型趨化因子受體抗體 |
CUTL1蛋白抗體 | 轉(zhuǎn)化蛋白p21抗體(原癌基因H-ras抗體) |
IGFBP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | MKN-28(人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
前列腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基PEpiCM | SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CPB1 Others Mouse 小鼠 CPB1 / PCPB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | COLEC10 Others Mouse 小鼠 COLEC10 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CD2 Others Mouse 小鼠 CD2 / LY37 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SK-BR-3細(xì)胞,人癌細(xì)胞 草魚腎細(xì)胞系,GIK細(xì)胞 肺大靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
CM-H101新生兒表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠皮膚肥大原代細(xì)胞顆粒細(xì)胞分化蛋白抗體 |
小鼠紅白血病細(xì)胞;MEL 小鼠氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WML6.0 | IGSF8 Others Mouse 小鼠 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 20號(hào)染色體開放閱讀框141抗體 |
轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體 | BxPC-3細(xì)胞,人原位胰腺腺癌細(xì)胞 人皮膚纖維微細(xì)胞系,Malmc細(xì)胞 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 |
酸化Bcl-xL蛋白抗體 | 核仁蛋白C23抗體 |
眼發(fā)育相關(guān)基因蛋白ODAG抗體 | IGFBP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。