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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠腎臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腎 |
英文名稱 | Mouse Renal Microvascular Cells | 貨號(hào) | YS-01X8528 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎臟；腎臟是小鼠的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，可分為腎實(shí)質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到，腎實(shí)質(zhì)分內(nèi)外兩層：外層為皮質(zhì)，內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實(shí)質(zhì)表層，富含血管，新鮮時(shí)呈紅褐色，由一百多萬(wàn)個(gè)腎單位組成。每個(gè)腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成，部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間，成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面，血管較少，色淡紅，為10-20個(gè)錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面，向腎門，錐體主要組織為集合管，錐體稱腎乳頭，每一個(gè)乳頭有10-20個(gè)乳頭管，向腎小盞漏斗部開(kāi)口。在腎竇內(nèi)有腎小盞，為漏斗形的膜狀小管，圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個(gè)腎小盞，相鄰2-3個(gè)腎小盞合成一個(gè)腎大盞。每腎有2-3個(gè)腎大盞，腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細(xì)，移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個(gè)毛細(xì)血管團(tuán)，稱為腎小球，腎小球是個(gè)血管球。它由腎動(dòng)脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層，兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管，尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的毛細(xì)血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細(xì)血管；分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管，除有縫隙連接外，細(xì)胞本身有許多小孔，（孔徑800-1000埃），稱有孔毛細(xì)血管；分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管，管腔擴(kuò)大，稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)（8-10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同，由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的，有較寬的細(xì)胞隙（0.1-0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無(wú)基膜，通透性比毛細(xì)血管大，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過(guò)。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì)，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B | 干擾素α16抗體 |
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體 | 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白106抗體 |
ELAVL1抗體 | 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 |
癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)） | 橋粒糖蛋白4抗體 |
嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體 | 結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體 |
人成纖維母細(xì)胞-(HDF-a)( 5×105 ) | HEL(人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | PRKD3 Others Human 人 PKC nu / PRKD3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞(HA-sp)(1×106) 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 Human | TNFSF8 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞;WI38/VA13 人胰島β細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | PPT1 Others Human 人 PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CM-H057人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠腎臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 |
CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CHO, 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系 其它 |
人成骨肉瘤細(xì)胞;MG-63 | MERTK Others Human 人 Mer / MERTK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
AL7P/HL-60R細(xì)胞，人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞 615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株,L7712細(xì)胞 孔雀綠酸鹽檢測(cè)試劑盒MGmP | 鈣離子通道a1F亞型抗體 |
電壓門控鉀通道蛋白KVβ.2抗體 | CFHR2 Others Human 人 CFHR2 / FHR2 / HFL3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Alpha清蛋白抗體 | 核仁和紡錘體相關(guān)蛋白1抗體 |
轉(zhuǎn)錄因子Gli3抗體 | 人成纖維母細(xì)胞-(HDF-a)( 5×105 ) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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