小鼠輸卵管上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代胚肺成纖維細(xì)胞 SF763(人腦瘤細(xì)胞) CNE 人鼻咽癌細(xì)胞 1ml/T75 C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Rattus A9 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 大鼠原代顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞

小鼠輸卵管上皮原代細(xì)胞

小鼠輸卵管上皮細(xì)胞分離自輸卵管組織；輸卵管位于子宮底兩側(cè)，包裹在子宮闊韌帶上緣內(nèi)。自子宮兩角分別伸展至左、右卵巢，是輸送卵細(xì)胞進(jìn)入子宮的管道，也是卵受精的場所。輸卵管主要分漏斗部、壺腹部、峽部和子宮部，管壁均由粘膜、肌層和漿膜三層組成。粘膜形成許多縱行而分支的皺襞，壺腹部的皺襞發(fā)達(dá)，高而多分支，故管腔不規(guī)則；至子宮部的皺襞漸減少。粘膜上皮為單層柱狀。由纖毛細(xì)胞和分泌細(xì)胞組成。纖毛細(xì)胞以漏斗部和壺腹部多，至峽部和子宮部逐漸減少，纖毛向子宮方向擺動，使卵移向子宮并阻止病菌進(jìn)入腹膜腔.分泌細(xì)胞表面有微絨毛，頂部胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒，其分泌物構(gòu)成輸卵管液。輸卵管上皮細(xì)胞在卵巢雌激素和孕激素的作用下，隨月經(jīng)周期而有變化。雌激素促進(jìn)輸卵管上皮細(xì)胞的生長的功能活動，在子宮內(nèi)膜增生晚期(排卵前)。纖毛細(xì)胞變成高柱狀，纖毛增多，分泌細(xì)胞頂部充滿分泌顆粒，功能旺盛。至分泌晚期，兩種細(xì)胞均變矮，分泌細(xì)胞的分泌顆粒排空，纖毛細(xì)胞的纖毛也減少。

產(chǎn)品名稱：小鼠輸卵管上皮細(xì)胞

組織來源：輸卵管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

方法簡介

普諾賽實驗室分離的小鼠輸卵管上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

普諾賽實驗室分離的小鼠輸卵管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

 

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。