詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血巨噬采用取外周血、通過密度梯度離心法、差速貼壁、細(xì)胞因子誘導(dǎo)法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血巨噬經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠外周血巨噬原代細(xì)胞 | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Mouse Peripheral Blood Macrophage Cells | 貨號 | YS-01X8533 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介:
小鼠外周血巨噬細(xì)胞分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細(xì)胞較易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養(yǎng),難以長期生存。巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球,源自單核細(xì)胞,而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞,在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫)。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化),并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞,令其對病原體作出反應(yīng)。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):巨噬細(xì)胞樣
傳代特性:屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:(12mM)
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠外周血巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
EL4IL-2細(xì)胞,淋巴瘤細(xì)胞 人急性早幼粒白血病細(xì)胞,NB4細(xì)胞 人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE) | 核孔蛋白GLE1抗體 |
Toll樣受體6抗體 | 嘧啶P450 2C19抗體 |
麥芽糖孔蛋白抗體 | 低分子質(zhì)量蛋白2抗體 |
型一氧合成酶結(jié)合蛋白抗體 | 羥類固醇脫氫酶17β抗體(17β-HSD8) |
抗體 | 甲精結(jié)合蛋白17抗體 |
興國鯉尾鰭細(xì)胞;XGL | CL-0173NRK(大鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
HepG2細(xì)胞,肝細(xì)胞癌 人T淋巴瘤細(xì)胞系,Hut-102細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3 | ACHN(人腎癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL7 Protein Rat 重組大鼠 IL7 / ierleukin 7 蛋白 |
CL-0368INS-1(大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人角膜細(xì)胞cDNAHK cDNA |
ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP](穩(wěn)定株)小鼠軟骨細(xì)胞 ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP] (stable sain) mice cartilage cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS | 小鼠外周血巨噬原代細(xì)胞低分子質(zhì)量蛋白2抗體 |
胰腺星狀細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | CHL1 Others Human 人 CHL1 / CALL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
AGO3 Others Human 人 AGO3 / Argonaute 3 / EIF2C3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-R020大鼠上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
CCL2 Protein Mouse 重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 糖基轉(zhuǎn)移酶25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶2抗體 |
鈣激活的蛋白酶2抗體 | 大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
原鈣粘蛋白β3抗體 | 表皮膜蛋白1抗體 |
酪酶抗體 | 興國鯉尾鰭細(xì)胞;XGL |