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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的小鼠外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的小鼠外周血樹突狀細胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Mouse Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8535 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠外周血DC細胞分離自外周血，由外周血單核細胞誘導而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細胞呈圓形，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答，不能激活T細胞的第二信號，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形、梭形、多角形，形態(tài)多樣
傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
人支氣管上皮細胞HBEpiC | 誘導協(xié)同刺激分子配體CD275抗體 |
酸二酯酶5A抗體 | IV型膠原蛋白/4型膠原蛋白/膠原蛋白4抗體 |
鐵螯合酶抗體 | MAL蛋白抗體 |
趨化素樣蛋白抗體 | 胞漿接頭蛋白Dok6抗體 |
肌動蛋白調(diào)節(jié)蛋白CAPG抗體 | 組蛋白H4抗體 |
PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細胞裂解液 (陽性對照) | C6(大鼠膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino |
牛腎細胞;MDBK | IFNGR1 Others Mouse 小鼠 IFNGR1 / CD119 人細胞裂解液 (陽性對照) |
TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人細胞裂解液 (陽性對照) | MAPK12 Others Human 人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
LS 180(人結腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 原代上皮細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml | LCC1細胞，人癌細胞 VERO衍生株,SVP細胞 成骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
CM-H030人外周血白細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞)MAL蛋白抗體 |
CHMAS細胞，人肥大細胞白血病細胞 小鼠結腸癌細胞,CT26.WT[CT26WT]細胞 支氣管上皮細胞生長添加物BEpiCGS | 人腦血管周細胞裂解物HBVCL |
狗腎細胞隆突型;MDCK superdome | ANGPTL7 Others Cynomolgus 食蟹猴 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IL10 Others Human 人 IL10 / Ierleukin-10 人細胞裂解液 (陽性對照) | 4號染色體開放閱讀框22抗體 |
Kazrin蛋白抗體 | MKN-28細胞，人胃癌細胞 人骨肉瘤細胞,U-2 OS細胞 幼蚊細胞;C6/36 |
酸化絲狀肌動蛋白結合蛋白抗體 | 環(huán)一螺旋蛋白1抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體106抗體 | PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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