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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠小腸血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠小腸血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠小腸血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 小腸組織 |
英文名稱 | Mouse Small Intestine Vascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7146 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動功能，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動的動力，促使食物向下運(yùn)動。血管內(nèi)皮細(xì)胞除了吞噬異物、細(xì)菌、壞死和衰老的組織等，還參與集體免疫活動，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動脈硬化；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì)，如白血球進(jìn)出血管。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
人正常上皮細(xì)胞;MCF 10A | 5-三酸肌醇受體2抗體 |
過氧化還原酶5/6抗體 | 20號染色體開放閱讀框27抗體 |
膠質(zhì)細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白1抗體 | G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 |
細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體 | 癌中心體相關(guān)蛋白抗體 |
細(xì)胞毒性T細(xì)胞抗原-4抗體 | 羥基類固醇脫氫酶3α抗體 |
人肺動脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC) ( 5×105 ) | CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
尿道上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Bcap-37(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R115大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-16 | FZD4 Others Rat 大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
EPCAM Others Mouse 小鼠 EpCAM / OP1 / CD326 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | PT-67細(xì)胞，病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞 人肺巨細(xì)胞癌(PG)的高轉(zhuǎn)移亞系,PG-BE1細(xì)胞 腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
CM-H024人胰腺星狀細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠小腸血管內(nèi)皮原代細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 |
HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系 昆蟲卵巢細(xì)胞，SF9細(xì)胞 NK-92(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞) | 人內(nèi)根殼細(xì)胞cDNAHHIRSC cDNA |
CM-R054大鼠子宮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
小鼠條紋細(xì)胞(MN-s)(1×106) 5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 Human | 鈣粘附蛋白8抗體 |
DNA修復(fù)酶Ku70抗體 | Panc 10.05細(xì)胞，人胰腺腺癌細(xì)胞 人舌鱗癌細(xì)胞系,TSCCA細(xì)胞 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 |
水通道蛋白-9抗體 | 核因子1B抗體 |
腦膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白2抗體 | 人肺動脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC) ( 5×105 ) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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