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一，內(nèi)毒素檢測(cè)（凝膠法）的原理
酶原 內(nèi)毒素 凝固酶
凝固原 凝固酶 凝固素
革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素催化了LAL中酶原的活化。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定。活化后的酶（凝固酶）水解了也存在于LAL中的凝血蛋白（凝固原）內(nèi)的特定化合鍵。水解后，產(chǎn)生的凝固素自行聯(lián)合，并形成凝膠狀膠塊。
凝膠法是一種用于革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素的測(cè)試。凝膠法在37℃的水浴或干燥熱塊中放置的試管中操作。孵育一小時(shí)后，將試管翻轉(zhuǎn)180°。凝塊牢固地附著在試管底部，表明是陽(yáng)性反應(yīng)。如果液體從試管側(cè)面向下流動(dòng)，則結(jié)果是內(nèi)毒素陰性。
二，檢測(cè)所需主要設(shè)備及材料
試劑
– 鱟試劑（LAL）（PYROGENT™ 試劑）
– 內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）
– LAL 試劑檢查用水（LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)
器具
– 玻璃稀釋管，13 × 100 mm（# N207）
– 玻璃反應(yīng)管，10 × 75 mm（# N201, N205）
– 獨(dú)立包裝的血清吸管（選購(gòu)）
– 標(biāo)簽
請(qǐng)使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無(wú)熱原器具。
設(shè)備
– 加熱塊或非循環(huán)熱水浴
– 移液器
– 計(jì)時(shí)器
– 漩渦混合器
– 試管架
三，操作步驟
本指南分步描述了如何進(jìn)行傳統(tǒng)凝膠法 鱟試劑（以下簡(jiǎn)稱LAL）試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。
四，注意事項(xiàng)
– 使用配套的LAL和CSE 試劑
– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素
– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議
– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無(wú)熱原器具
– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同
– 不要對(duì)LAL進(jìn)行漩渦震蕩
– 不要污染樣品、標(biāo)準(zhǔn)品、LRW 和器具
– 應(yīng)正確安裝、驗(yàn)證并維護(hù)設(shè)備儀器，避免影響凝膠形成
五，瑋馳相關(guān)產(chǎn)品
| 凝膠法LAL試劑盒 | ||||
| 品牌 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 | 靈敏度(EU/ml) |
| Lonza | N283-06 | PYROGENT™+凝膠法LAL試劑盒（有內(nèi)毒素） | 64次測(cè)試 | 0.06 |
| Lonza | N283-125 | PYROGENT™+凝膠法LAL試劑盒（有內(nèi)毒素） | 64次測(cè)試 | 0.125 |
| Lonza | N294-03 | PYROGENT™+凝膠法LAL試劑盒（有內(nèi)毒素） | 200次測(cè)試 | 0.03 |
| Lonza | N294-06 | PYROGENT™+凝膠法LAL試劑盒（有內(nèi)毒素） | 200次測(cè)試 | 0.06 |
| Lonza | N294-125 | PYROGENT™+凝膠法LAL試劑盒（有內(nèi)毒素） | 200次測(cè)試 | 0.125 |
| LAL試劑檢查用水 | |||
| 品牌 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | W50-640 | LAL試劑檢查用水 | <0.005 EU/mL,30 ml/瓶 |
| Lonza | W50-100 | LAL試劑檢查用水 | <0.005 EU/mL,100 ml/瓶 |
| Lonza | W50-500 | LAL試劑檢查用水 | <0.005 EU/mL,500 ml/瓶 |
| Lonza | W50-1000 | LAL試劑檢查用水 | <0.005 EU/mL,1000 ml/瓶 |
| 無(wú)熱原試管 | |||
| 品牌 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | N207 | 無(wú)熱原試管 | 30/鋁箔包 |
| Lonza | N201 | 無(wú)熱原試管 | 50/箱 |
| Lonza | N205 | 無(wú)熱原試管 | 50/鋁箔包 |
| 吸頭 | |||
| 品牌 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | BE25-415 | Eppendorf® 2-200μl Biopur™ 移液管吸頭 | <0.001 EU/mL，5個(gè)托盤(pán)/pkg;96個(gè)吸頭/托盤(pán) |
| Lonza | BE25-417 | Eppendorf® 50-1000μl Biopur™ 移液管吸頭 | <0.001 EU/mL，5個(gè)托盤(pán)/pkg;96個(gè)吸頭/托盤(pán) |
