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一，細(xì)胞潤(rùn)洗次數(shù)
絕大部分細(xì)胞用胰酶潤(rùn)洗一次即可
胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。
由于在細(xì)胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。胰酶作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、作用次數(shù)過(guò)多，都容易破壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。
在吸去培養(yǎng)基后，用37℃預(yù)熱過(guò)的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞表面1-2次，隨后加入適量胰酶，以能夠平鋪在器皿底部一層，略蓋過(guò)細(xì)胞為原則?？煞湃?7℃培養(yǎng)箱中孵育1-2分鐘。
二，何時(shí)終止消化
貼壁細(xì)胞層呈流沙狀可移動(dòng)即可終止消化
有不少細(xì)胞培養(yǎng)人員，喜歡把全部細(xì)胞，消化成間隔分布很離散的單個(gè)圓形的細(xì)胞，但實(shí)際上，此時(shí)的細(xì)胞已經(jīng)處于“消化過(guò)度"的狀態(tài)了。
因此，肉眼觀察下，50%左右細(xì)胞呈現(xiàn)流沙狀，或鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，即可加入胰酶2-3倍體積的含血清培養(yǎng)基，終止消化。
逐典TrypLUS消化液是一種胰蛋白酶類(lèi)似物（Trypsin Like Enzyme），是一種通過(guò)生物工程制備的非動(dòng)物源性重組蛋白酶，與胰蛋白酶有相似的解離動(dòng)力學(xué)，穩(wěn)定性更高，純度更好，消化更溫和，細(xì)胞毒性更低。目前主要應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中，可以在賴(lài)氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵，可以替代豬或牛胰蛋白酶（Trypsin）對(duì)貼壁細(xì)胞的消化解離。生物制藥中，GMP級(jí)別的TrypLUS能夠?yàn)橐呙缟a(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)提供高質(zhì)量和高性?xún)r(jià)比的貼壁細(xì)胞消化解決方案。
逐典TrypLUS消化液優(yōu)勢(shì)
1. DMF備案
2. 非動(dòng)物來(lái)源
3. 室溫貯存，無(wú)需胰酶抑制劑，稀釋即可終止
4. 消化溫和，消化后細(xì)胞活性高
5. 即開(kāi)即用，方便快捷
逐典TrypLUS消化液應(yīng)用案例
