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突破細(xì)胞轉(zhuǎn)染障礙:電穿孔技術(shù)非病毒基因轉(zhuǎn)染與六大應(yīng)用分享

2024-6-18  閱讀(233)

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傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染技術(shù)無法有效轉(zhuǎn)染許多常用于細(xì)胞療法的細(xì)胞類型,如原代T細(xì)胞。而電穿孔是一種強大的轉(zhuǎn)染工具,它利用電脈沖瞬時增加細(xì)胞膜的通透性,使裸物質(zhì)(如DNA/RNA、蛋白質(zhì)等)短時大量進(jìn)入細(xì)胞完成載體遞送,以更低成本、更靈活高效和更安全可持續(xù)的優(yōu)勢,成為非病毒載體轉(zhuǎn)染中前景的新興技術(shù)之一。

然而你真的了解電穿孔技術(shù)嗎



RegMedNet所推出的電穿孔工具書中邀請到了Arsenal Biosciences聯(lián)合創(chuàng)始人Theodore RothLonza細(xì)胞工程研發(fā)主管Ludger Altrogge,重點回答了六道精華問題。




Theodore Roth

Arsenal Biosciences

聯(lián)合創(chuàng)始人



Ludger Altrogge

Lonza細(xì)胞工程研發(fā)主管


Interview

超越障礙:

關(guān)于非病毒轉(zhuǎn)染的訪談

Q1

Ludger, 電穿孔等非病毒方法在基因修飾方面的優(yōu)勢在哪里?

非病毒方法在使用的貨物/底物類型方面具有靈活性。例如,它不能只傳遞核酸(DNA、mRNA),也不能傳遞蛋白質(zhì),如用于CRISPR基因編輯的Cas9 RNPs。非病毒方法既適用于治療基因的瞬時表達(dá),也適用于細(xì)胞的穩(wěn)定遺傳工程。前者可以通過通過傳遞mRNA或DNA(質(zhì)粒、而轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)(如睡美人或 PiggyBac)以及用于定向整合的工程化核酸酶(如CRISPR)可實現(xiàn)穩(wěn)定的細(xì)胞基因工程?;诓《竞娃D(zhuǎn)座酶的改造通常更有效,但由于整合在基因組中隨機發(fā)生,因此可控性較差。將工程化的核酸酶作為重組的RNPs運送,可以更好地控制修飾的劑量。

Q2

Theo,你是如何在實驗室中使用電穿孔技術(shù)的?

Q3

Ludger,你能詳細(xì)介紹一下龍沙提供的非病毒基因轉(zhuǎn)移技術(shù)嗎?

Q4

Theo,在你看來,使用Nucleofector™技術(shù)進(jìn)行CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組編輯有哪些優(yōu)勢?

Q5

Theo,你們也進(jìn)行 CRISPR 篩選嗎?

Q6

Theo,您認(rèn)為核轉(zhuǎn)染技術(shù)在治療方法和藥物開發(fā)中的應(yīng)用前景如何?

除此之外,更有以下內(nèi)容免費分享給大家。

Review:對間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行改造以增強骨靶向性和骨再生能力



Poster:誘導(dǎo)性Cas9 T細(xì)胞:異體CAR-T細(xì)胞生成的創(chuàng)新平臺



Research article:用于體內(nèi)應(yīng)用的人CD34+祖細(xì)胞的高效瞬時基因標(biāo)記

Poster:原代人類肝細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染和長期持續(xù)功能性



Review:CRISPR介導(dǎo)的DNA甲基化模式修飾在癌癥治療新時代的應(yīng)用

Benchmark:通過流式細(xì)胞術(shù)和桑格測序評估CRISPR/Cas9介導(dǎo)的CD19基因敲除GM24385細(xì)胞的方案


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