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液相色譜測定氯化膽堿農(nóng)藥制劑中的氯離子
閱讀：36 發(fā)布時間：2025-6-5前言氯化膽堿是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，常用于調(diào)節(jié)大蒜、甘薯、花生、蘿卜、馬鈴薯、山藥生長，能夠明顯增加作物的產(chǎn)量，提高經(jīng)濟效益，因此廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)栽培領(lǐng)域[1-3]。另外，氯化膽堿在飼料及食品中作為添加劑和營養(yǎng)強化劑也得到廣泛使用，針對其含量測定已經(jīng)有相應(yīng)的國家標準和行業(yè)標準，這些標準分析方法以離子色譜法和雷氏鹽重量法為主[4-7]，也有文獻報道采用 CEXHPLC-ELSD 法測定嬰幼兒配方奶粉中膽堿離子的含量[8-9]。但針對農(nóng)藥中作為植物生長調(diào)節(jié)劑的氯化膽堿的分析，目前尚未建立標準方法。同時，現(xiàn)行的飼料及食品標準檢測方法均只定量分析膽堿離子，但農(nóng)藥登記相關(guān)指南和標準指出，當有效成分以鹽的形式存在時，除標明有效成分母體含量外，還應(yīng)標明其實際存在形式及含量[10-11]。這就意味著，在氯化膽堿農(nóng)藥制劑分析中，除測定膽堿離子以外，還必須同時進行氯離子的含量測定。采用離子色譜法測定農(nóng)藥制劑中氯離子[12] 和膽堿離子[13] 的含量已見諸文獻報道，但離子色譜法通常采用強酸/堿作為洗脫液，且分析陰離子和陽離子所需的洗脫液和色譜柱截然不同，通常需要建立兩套獨立的方法；而且不同檢測項目間的切換也必須經(jīng)過復(fù)雜的系統(tǒng)再生和凈化等后處理步驟。
與離子色譜法相比，親水相互作用色譜與蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用法 (HILIC-ELSD) 可在單次進樣運行中同時分析陽離子、陰離子和中性化合物；并采用水-乙腈作為洗脫液，無需添加強酸或堿性添加劑，操作更加簡單；同時結(jié)合更高效的硅膠型基質(zhì)色譜柱，能夠加快分析速度。本實驗基于 Agilent 1290 Infinity II UHPLC系統(tǒng)，通過單針運行，在 5 min 內(nèi)即可同時分析氯離子和膽堿離子；采用氯化鈉作為對照品，通過外標法進行定量，對氯化膽堿水劑中的氯離子含量進行了測定。
實驗部分試劑和樣品乙腈為色譜級，購自迪馬公司；甲酸銨和甲酸為質(zhì)譜級，購自Sigma 公司；實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；氯化鈉 (99.9% metals basis) 購自麥克林公司；75.2% 氯化膽堿水劑樣品由用戶提供。
儀器和設(shè)備采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)，配備如下安捷倫組件：Agilent 1290 Infinity II 四元泵（部件號 G7104A）、Agilent1290 Infinity II bio 多功能自動進樣器（部件號 G7137A）、Agilent1290 Infinity II 柱溫箱（部件號 G7116B）和 Agilent 1290 InfinityII ELSD（部件號 G7102A）。標準溶液制備稱取 0.3297 g 氯化鈉于 100 mL 容量瓶中，加溶劑（水:乙腈 =7:3，V/V）定容至刻度線，超聲 5 min，配制得到氯離子濃度為2000 μg/mL 的對照品母液；然后用溶劑（水:乙腈 = 7:3，V/V）進一步稀釋，分別得到 5、10、25、50、100、250 和 500 μg/mL的對照液，上機分析。
樣品前處理試樣溶液 1：稱取 0.0303 g 的 75.2% 氯化膽堿水劑于 50 mL 容量瓶中，加溶劑（水:乙腈 = 7:3，V/V）定容至刻度線；加標試樣溶液 2：稱取 0.0300 g 的 75.2% 氯化膽堿水劑于 50 mL容量瓶中，加入 1.5 mL 濃度為 2000 μg/mL 的氯化鈉對照品母液，再加溶劑（水:乙腈 = 7:3，V/V）定容至刻度線；加標試樣溶液 3：稱取 0.0305 g 的 75.2% 氯化膽堿水劑于 50 mL容量瓶中，加入 3 mL 濃度為 2000 μg/mL 的氯化鈉對照品母液，再加溶劑（水:乙腈 = 7:3，V/V）定容至刻度線；將上述三種樣品溶液一同在常溫下超聲 5 min 后上機分析。
色譜條件色譜柱： Agilent Poroshell HILIC-Z, 2.1 × 100 mm, 2.7 μm流速： 0.4 mL/min進樣量： 1 µL柱溫： 30 °C流動相： A) 20 mM 甲酸銨水溶液（含 0.1% 甲酸） B) 乙腈等度洗脫： 流動相 A:流動相 B = 15:85運行時間： 5 minELSD 檢測器： 氣流：1.2 SLM，霧化溫度：50 °C，蒸發(fā)溫度：50 °C
靈敏度當氯化鈉進樣濃度為 5 μg/mL 且進樣量為 1 μL 時，所得色譜圖如圖 4 所示。其中氯離子的信噪比 (S/N) 達到 16，遠遠高于 S/N > 3的要求，表明該方法具有出色的靈敏度。
結(jié)論本實驗采用親水相互作用色譜與蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用法(HILIC-ELSD)，建立了一種測定氯化膽堿水劑中氯離子含量的5 min 快速分析方法。方法性能考察結(jié)果表明，所開發(fā)的方法具有良好的線性、靈敏度、精密度和準確度。同時，在試樣溶液的色譜圖中，氯離子與膽堿離子得到基線分離，且不受其他基質(zhì)組分的干擾。因此，也可以將該方法同時應(yīng)用于膽堿離子的含量測定，實現(xiàn)通過單針進樣同時測定陰離子和陽離子的目的。與離子色譜法相比，本文所述的方法更加簡便快捷。