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重組蛋白真核表達(dá)采用原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中，通過(guò)IPTG誘導(dǎo)和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，所需成本相對(duì)較低。
目前的表達(dá)系統(tǒng)各有利弊，但一般理想的表達(dá)系統(tǒng)滿足以下幾點(diǎn)：一是特異性，不受其他內(nèi)源性因素影響，只能通過(guò)外源性無(wú)毒物激活。二是不干擾，不干擾細(xì)胞通路。以及誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。
因此，在選擇表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，必須充分考慮各種因素，如蛋白質(zhì)性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)條件、生產(chǎn)成本、表達(dá)水平和安全性。權(quán)衡利弊后，選擇相應(yīng)的表達(dá)系統(tǒng)。
原核表達(dá)系統(tǒng)與重組蛋白真核表達(dá)系統(tǒng)的區(qū)別：
1.根本的區(qū)別是，原核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)系統(tǒng)是原核細(xì)胞；真核表達(dá)系統(tǒng)在真核細(xì)胞如酵母細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。
2.兩種表達(dá)系統(tǒng)都通過(guò)含有原核或真核啟動(dòng)子和其他表達(dá)相關(guān)元件的質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)外源基因。
3.與真核表達(dá)系統(tǒng)相比，原核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)效率易于優(yōu)化和調(diào)整，表達(dá)量高。然而，當(dāng)用于表達(dá)真核外源基因時(shí)，由于不同的蛋白質(zhì)折疊和糖鏈修飾，其應(yīng)用受到限制。真核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量相對(duì)較低。雖然酵母和昆蟲(chóng)系統(tǒng)的表達(dá)量相對(duì)較高，但哺乳動(dòng)物基因的表達(dá)也存在不足。
