Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

Tuner(DE3)Chemically Competent Cell
產(chǎn)品編碼：                        保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞基因型:

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)
 

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明:

 Tuner（DE3）菌株是BL21菌株的 lacZY基因（半乳糖苷透性酶基因）突變株，此突變導(dǎo)致IPTG以均一速度進(jìn)入體系中大腸桿菌的每個(gè)細(xì)胞，產(chǎn)生更加嚴(yán)格、均一的濃度依賴(lài)。
此菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。
λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于Tuner的染色體上，所以稱(chēng)為Tuner（DE3） ，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。
 Tuner（DE3）感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁷cfu/μg。

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1.  取100μl冰上融化的Tuner（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
 

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng):

1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-40mM均可）。
5.  為獲得需要量的蛋白，時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
6.