F-*0
F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞

F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK  rpsL

(Strr)endA1 nupG
F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：

*0 菌株來(lái)源于 MC1061，是目前實(shí)驗(yàn)室的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與 DH10B 高度類似 (DH10B 為 galE15 型，而 *0 為 galU 型)。-CMbio-
*0 生長(zhǎng)速度快，37℃，10 小時(shí)可見克隆。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取?？捎糜跇?gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。-CMbio-
-CMbio-F-*0 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無(wú)需 42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min 內(nèi)完成轉(zhuǎn)化、 涂板操作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 1~5×108 cfu/μg DNA。
F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞快速轉(zhuǎn)化操作方法  (10min)

1.  提前 15 分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到 37℃預(yù)熱 -CMbio-
2. F-*0 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用

手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-

3. 用 200μl 槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA 混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng) 37℃預(yù)熱的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。-CMbio-

4. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 13 h。-CMbio-

F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法  (25min,可提高轉(zhuǎn)化效率)
1. F- *0 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用 手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘 (晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，

200 rpm  復(fù)蘇 10 分鐘，涂板 (均勻，表面無(wú)水漬)。-CMbio-

3. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 15h。-CMbio-

F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1. F-*0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作，對(duì)于>7 kb 質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步驟操作： F-*0 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，插入冰中，5 分鐘后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底輕輕混勻，冰中靜置 20 分鐘。42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰中靜置 2 分鐘。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 復(fù)蘇 30 分鐘，涂板。
2. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降 低轉(zhuǎn)化效率，混入目的 DNA 時(shí)應(yīng)輕柔操作。-CMbio-
3. F- *0 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時(shí)效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效 率下降(因無(wú)孵育步驟，卡那霉素等對(duì)菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可按熱激轉(zhuǎn)化操 作，增加孵育步驟。-CMbio-