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可見分光光度計原理
閱讀：2582 發(fā)布時間：2019-5-21
可見分光光度計廣泛應用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測、生物化學、石油化工、環(huán)保監(jiān)測、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門作定性、定量分析，還可作為大、專院校和中學相關(guān)課程的教學演示和實驗儀器。
分光光度計是目前化驗室中使用比較廣泛的一種分析儀器，其測定原理是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收特性，以較純的單色光作為入射光，測定物質(zhì)對光的吸收，從而確定溶液中物質(zhì)的含量。其特點是靈敏度高；準確度高；測量范圍廣；在一定條件下，可同時測定水樣中兩種或兩種以上的物質(zhì)組分含量等。
分光光度計按其波長范圍可分為可見分光光度計(工作范圍360～800nm)、紫外-可見分光光度計(工作范圍200～1000nm)和紅外分光光度計(工作范圍760～400000nm)等。
可見分光光度計的原理是，當一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時，當某一定頻率(或波長)的可見光所具有的能量(hf)恰好與待測物質(zhì)分子中的價電子的能級差相適應(即ΔE=E2-E1=hf)時，待測物將對該頻率(波長)的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見分光光度計可以測量和記錄其吸收程度(吸光度)。由于在一定條件下，吸光度A與待測物質(zhì)的濃度C及吸收地長度l的乘積成正比，即A=KCL，所以，在測得吸光度A后，可采用標準曲線法、比較法以及標準加入法等方法進行定量分析。
可見分光光度計是一種結(jié)構(gòu)簡潔、使用方便的單光束分光光度計，基于樣品對單色光的選擇吸收特性可用于對樣品進行定性和定量分析。其定量分析根據(jù)相對測量原理工作，即選定樣品的溶劑(或空氣)作為標準試樣，設定其透射比為100%，被測樣品的透射比則相對于標準試樣(或空氣)而得到，在一定的濃度范圍，各參量遵循朗伯—比耳定律：A=lg1/T=KCL
T=I/I0
A:吸光度
T:相對于標準試樣的透射比
I:光透過被測樣品后照射到光電傳感器上的強度I0:光透過標準試樣后照射到光電傳感器上的強度
K:樣品溶液的比消光系數(shù)
L:樣品溶液在光路中的長度
C:樣品濃度