NTC胎牛血清出現(xiàn)顏色或沉淀的問題

NTC胎牛血清

貨號：SFBE

阿根廷

1、問：我用的是四季青的胎牛血清，56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀，是不是污染？還能不能 再用？血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日)。

答：應(yīng)該問題不大。你可以取少量血清放入培養(yǎng)皿中，37℃過夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了。血清中沉淀 物的出現(xiàn)有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。

2、問：我用MTT法測細(xì)胞的增殖，用DMSO裂解細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培養(yǎng)基，由于沒有離板子的離心機(jī)，所以沒有去除培養(yǎng)基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒有 看到有這種情況。該怎么解決？

答：為什么要用離心機(jī)離心呢？難倒你養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞嗎？如果是貼壁細(xì)胞的話直接將MTT倒掉，再加DMSO 即可，我們就是這么做的，效果很好！并且測細(xì)胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大！有時(shí)不一定就是血清的原因，可能跟你的MTT放置的時(shí)間或以及其他成分有關(guān)！

原代培養(yǎng)：

當(dāng)采用外科操作的方法將細(xì)胞從有機(jī)體中分離下來，然后置于合適的培養(yǎng)環(huán)境中，它們會附著、分裂和生長。這稱為原代培養(yǎng)。

原代培養(yǎng)有兩種基本的方法。

第一種，使用外植塊，將小片的組織粘附到玻璃或經(jīng)處理的塑料培養(yǎng)瓶中，并浸于培養(yǎng)液中。幾天之后，單個(gè)細(xì)胞將從組織外植塊中移動(dòng)到培養(yǎng)瓶的表面或基質(zhì)中開始分裂生長。

第二種方法，也是使用更廣泛的方法，通過在組織碎片中加入消化（蛋白水解）酶，如胰酶或膠原酶，消化成團(tuán)聚集的細(xì)胞從而加快這一步驟。最終得到單細(xì)胞的懸液，然后將其置于含有培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，讓其繼續(xù)生長分裂。這種方法成為酶解。

3、問：(1)GIBCO胎牛血清500ml，今天解凍后沒有混勻直接分裝，結(jié)果使得前面的幾管是清亮的，后面就 帶有棕色的，不知有沒有影響？估計(jì)有什么影響？前面的成分好還是棕色的成分好??？

答：肯定有。最好還是重新混合重新分裝，我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。

問：(2)為什么會出現(xiàn)棕色呢？

答：血清中的棕色多一些可能是因?yàn)榧t蛋白的含量高些的緣故吧。

問：(3)血清滅活之后可以存放嗎？我的是前天mie活的，但是沒有加到培養(yǎng)基里，而是放在冰箱里，那下次 可以直接用嗎？還是再次滅活啊？

答：當(dāng)然可以，如果多的話，分裝后最好放在－20℃，下次用時(shí)再解凍，也不用再滅活。最好用一管拿一 管，少許血清可以放在4℃。分裝時(shí)還要注意不要裝得太滿，以免溢出污染。

關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

 (1)1%的血清wan全培養(yǎng)基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBSwan全培養(yǎng)基效果都不太好，開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問題，在FBSwan全培 養(yǎng)基中，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細(xì)胞。

 (2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

 (3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。