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技術(shù)文章

CAS檢測(cè)培養(yǎng)基原理和使用方法

閱讀:86          發(fā)布時(shí)間:2025-5-30

一、氫氧化細(xì)菌和鐵載體的簡(jiǎn)介:

  氫氧化細(xì)菌(Hydrogen-oxidizing bacteria)是一類能通過(guò)氧化氫氣獲得能量,固定二氧化碳作為唯yi碳源的微生物,土壤中分布廣泛,尤其是豆科植物根際大量存在。氫氧化細(xì)菌沒(méi)有單獨(dú)的分類,多分布在假單胞菌屬、副球菌屬、黃桿菌屬、分支桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、諾卡氏菌屬、醋酸桿菌屬及棒桿菌屬等。絕大部分氫氧化細(xì)菌是兼性化能自養(yǎng)型,它們可以自養(yǎng)生長(zhǎng)、異養(yǎng)生長(zhǎng)、甚至混合營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng),好氧或兼性厭氧。氫氧化細(xì)菌屬于植物根際促生菌,在農(nóng)作物增產(chǎn)方面有巨大的應(yīng)用潛力,所以其各種促生機(jī)制的研究已成為熱點(diǎn),其中分泌鐵載體就是幾種重要的促生機(jī)制之一。

  鐵載體(siderophore)是一類能特異性結(jié)合鐵離子并供給微生物細(xì)胞的低分子量物質(zhì)。鐵元素是微生物生長(zhǎng)的必需元素,在缺鐵的環(huán)境中微生物會(huì)分泌鐵載體螯合鐵離子滿足自身生長(zhǎng)需要。目前,常用的鐵載體檢測(cè)方法為Schwyn和Neilands發(fā)明的通用CAS瓊脂平板法,當(dāng)細(xì)菌產(chǎn)生的鐵載體與由鉻天青S(CAS)、十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA)、鐵離子組成的藍(lán)色復(fù)合物結(jié)合后,會(huì)奪走鐵離子,使細(xì)菌周圍的培養(yǎng)基顏色由藍(lán)色變?yōu)殚冱S色,出現(xiàn)鐵載體分泌圈,有利于判斷細(xì)菌是否產(chǎn)生鐵載體。


二、CAS檢測(cè)培養(yǎng)基

  1. 產(chǎn)品用途:用于細(xì)菌鐵載體篩選試驗(yàn)。

  2. 配方(mg/L):

鉻天青S(CAS)

60.5

十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA)

72.9

六水氯化鐵

2.645

二水磷酸二氫鈉

295.25

十二水磷酸氫二鈉

1213.5

氯化銨

125

磷酸二氫鉀

37.5

氯化鈉

62.5

瓊脂

9000

pH值6.8±0.1(25℃)


三、試驗(yàn)方法:

  1. 稱取本品10.87g,加熱煮沸完-全溶解于1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,116℃高壓滅菌30分鐘,冷卻至50℃時(shí),傾入無(wú)菌平皿,備用;

  2. 用接種環(huán)挑取質(zhì)控菌株新鮮培養(yǎng)物點(diǎn)種到平板上;

  3. 放置35℃需氧培養(yǎng)24小時(shí),記錄試驗(yàn)結(jié)果。


四、試驗(yàn)結(jié)果判斷:

  接種以下質(zhì)控菌株,放置于35℃需氧培養(yǎng)24小時(shí)。

質(zhì)控菌株

菌株編號(hào)

接種量(CFU)

參比或計(jì)數(shù)培養(yǎng)基

質(zhì)控結(jié)果

銅綠假單胞菌

ATCC 9027

/

/

菌落周圍有黃色環(huán)


圖1 銅綠假單胞菌ATCC 9027在CAS檢測(cè)培養(yǎng)基菌落特征




注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。



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