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基因合成儀原理
1、sanger法：雙脫氧測序的原理，DNA合成時加上一個ddNTP從而終止這條鏈的延伸，毛細(xì)管電泳讀取分析序列。一般教材講的都是這種方法，經(jīng)典，讀長800bp，但是通量小成本高。
2、高通量測序方法：454也稱焦磷酸測序，一個run下來約400M的數(shù)據(jù)量。將emulsionPCR產(chǎn)物連磁珠上，放入Pico Titer Plate，測序反應(yīng)是通過釋放PPi經(jīng)過ATP硫酸化酶和熒光素酶作用發(fā)光，CCD捕捉拍照，反應(yīng)是連續(xù)的，所以遇到連續(xù)的堿基如polyA時，454易產(chǎn)生誤差。
3、Solexa：邊合成邊測序，將DNA單鏈固定在芯片上，合成DNA簇，是一種可逆阻斷的合成反應(yīng)，每個循環(huán)只加上一個堿基、系統(tǒng)拍照一次。通過讀取拍照信號分析序列，一個run約200個G數(shù)據(jù)量以上。目前能量最高，不足是讀長短，現(xiàn)在有PE150，可以測通300bp。
4、Ion torrent：特點是小巧。試劑通過集成的流體通路進(jìn)入芯片中，密布于芯片上的反應(yīng)孔立即成為上百萬個微反應(yīng)體系。這種流體體系、微體系機(jī)械設(shè)計和半導(dǎo)體的技術(shù)組合，使研究人員能夠在2小時內(nèi)獲取從10Mb到1Gb以上的高精確度序列。*新一種，還沒廣泛應(yīng)用。