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流式細(xì)胞儀的參數(shù)測(cè)量原理看完這些你就知道了

閱讀:1668        發(fā)布時(shí)間:2020-9-27
  流式細(xì)胞儀(Flow cytometer )是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置。它可以快速測(cè)量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量,并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把的細(xì)胞亞群從中分選出來(lái)。
 
  多數(shù)流式細(xì)胞計(jì)是一種零分辨率的儀器,它只能測(cè)量一個(gè)細(xì)胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標(biāo),而不能鑒別和測(cè)出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說(shuō),它的細(xì)節(jié) 分辨率為零。
 
  下面讓我們一起來(lái)了解一下流式細(xì)胞儀的參數(shù)測(cè)量原理
 
  流式細(xì)胞儀可同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量,信息主要來(lái)自特異性熒光信號(hào)及非熒光散射信號(hào)。測(cè)量是在測(cè)量區(qū)進(jìn)行的,所謂測(cè)量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點(diǎn)。
 
  液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過(guò)測(cè)量區(qū)時(shí),受到激光照射會(huì)向立體角為2π的整個(gè)空間散射光線,散射光的波長(zhǎng)和入射光的波長(zhǎng)相同。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān),因?yàn)檫@些生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對(duì)光線的反射、折射等光學(xué)特性有關(guān)。
 
  未遭受任何損壞的細(xì)胞對(duì)光線都具有特征性的散射,因此可利用不同的散射光信號(hào)對(duì)不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。
 
  經(jīng)過(guò)固定的和染色處理的細(xì)胞由于光學(xué)性質(zhì)的改變,其散射光信號(hào)當(dāng)然不同于活細(xì)胞。散射光不僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān),還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān)。
 
  在流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量中,常用的是兩種散射方向的散射光測(cè)量:
 
  ①前向角(即0角)散射(FSC);②側(cè)向散射(SSC),又稱(chēng)90角散射。這時(shí)所說(shuō)的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號(hào)的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。
 
  一般說(shuō)來(lái),前向角散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞的大小有關(guān),對(duì)同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大;對(duì)球形活細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系;
 
  對(duì)于形狀復(fù)雜具有取向性的細(xì)胞則可能差異很大,尤其需要注意。側(cè)向散射光的測(cè)量主要用來(lái)獲取有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的顆粒性質(zhì)的有關(guān)信息。
 
  側(cè)向散射光雖然也與細(xì)胞的形狀和大小有關(guān),但它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,也能對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映。
 
  在實(shí)際使用中,儀器首先要對(duì)光散射信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。當(dāng)光散射分析與熒光探針聯(lián)合使用時(shí),可鑒別出樣品中被染色和未被染色細(xì)胞。光散射測(cè)量有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。

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