詳細(xì)介紹
相對(duì)定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:丁型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Hepatitis D Virus(HDV)RTPCR
貨號(hào):YS30873-R
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí),可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
hCG beta antibody [5H4-E2]原裝、分裝匹格列
TGF alpha antibody原裝、分裝匹格列
Recombinant TGF alpha protein原裝、分裝匹格列(標(biāo)準(zhǔn)品)
Recombinant TGF alpha protein原裝、分裝匹格列鹽鹽
FGF1 antibody原裝、分裝匹格列鹽鹽
Recombinant human FGF2 protein (Active)原裝、分裝匹格列鹽鹽
Recombinant human FGF2 protein (Active)原裝、分裝匹格列鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)
Recombinant human KGF protein原裝、分裝苯噻啶蘋果鹽
Recombinant human KGF protein原裝、分裝苯噻啶蘋果鹽Hsp60 antibody原裝、分裝Fmoc-L-beta-高谷氨6-叔酯
Involucrin antibody原裝、分裝高精氨
JM4/PRAF2 antibody原裝、分裝高精氨
EEF2/Elongation factor 2 (phospho T56) antibody原裝、分裝L-羥基脯氨(標(biāo)準(zhǔn)品)
Cytokeratin 19 antibody原裝、分裝L-羥基脯氨(標(biāo)準(zhǔn)品)
Cytokeratin 20 antibody原裝、分裝L-羥基脯氨
Cytokeratin 5 antibody原裝、分裝L-羥基脯氨
Cytokeratin 7 antibody原裝、分裝L-正亮氨
Ku70 + Ku80 antibody原裝、分裝L-正亮氨
丁型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒Recombinant Human HSPA6 protein原裝、分裝2-(4-聯(lián)苯基)-4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧環(huán)戊硼(>98.0%(GC))
Recombinant Human PAIP2 protein原裝、分裝4-溴-4'-聯(lián)苯(>98.0%(GC))
Recombinant Human PAIP2 protein原裝、分裝4-溴-4'-聯(lián)苯(>98.0%(GC))
Recombinant Human PNMT protein原裝、分裝4,4'-二-3,3'-二基聯(lián)苯(>98.0%(GC))
Recombinant Human PNMT protein原裝、分裝4,4'-二-3,3'-二基聯(lián)苯(>98.0%(GC))
Human Relaxin 3 receptor 1 peptide原裝、分裝4,4''-二氨基對(duì)三聯(lián)苯(>98.0%(HPLC)(T))
Human B2R peptide原裝、分裝4,4''-二氨基對(duì)三聯(lián)苯(>98.0%(HPLC)(T))
IGF2 antibody [MM0349-5L20]原裝、分裝4,4''-二基對(duì)三聯(lián)苯(>97.0%(N))
Human Sialidase-3 peptide原裝、分裝1-氨基芘(>98.0%(HPLC)(T))
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長(zhǎng)期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
?5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。