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注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大?。?br/>2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作方法（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
●  一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
●  涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）

S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A9 (S100A9) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
干擾素誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
SATB同源框蛋白1(SATB1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for SATB Homeobox Protein 1 (SATB1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
乳酸脫氫酶C(LDHC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Lactate Dehydrogenase C (LDHC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
貓眼綜合征染色體區(qū)候選基因1(CECR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cat Eye Syndrome Chromosome Region, Candidate 1 (CECR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6(GAS6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Growth Arrest Specific Protein 6 (GAS6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
信號(hào)素3E(SEMA3E)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Semaphorin 3E (SEMA3E) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗凝血酶(AT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Antithrombin (AT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
絨毛蛋白1(VIL1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Villin 1 (VIL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Prostate Stem Cell Antigen (PSCA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前胸腺素α(PTMα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Prothymosin Alpha (PTMa) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Kruppel樣因子1(KLF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Kruppel Like Factor 1, Erythroid (KLF1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
鈉/氫交換因子1(NHE1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sodium/Hydrogen Exchanger 1 (NHE1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
不均一核核糖核蛋白K(HNRPK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein K (HNRPK) 48T/96T Homo sapiens (Human)
甘油磷酸肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1(GPIHBP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glycosylphosphatidylinositol Anchored High Density Lipoprotein Binding Protein 1 (GPIHBP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
胰島素樣蛋白3(INSL3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Insulin Like Protein 3 (INSL3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
NEL樣蛋白2(NELL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for NEL Like Protein 2 (NELL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
角蛋白14(KRT14)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Keratin 14 (KRT14) 48T/96T Homo sapiens (Human)
谷氨酰胺果糖-6-磷酸轉(zhuǎn)氨酶2(GFPT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glutamine Fructose-6-Phosphate Transaminase 2 (GFPT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
二肽基肽酶6(DPP6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase 6 (DPP6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
反式高爾基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)蛋白2(TGOLN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Trans Golgi Network Protein 2 (TGOLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
內(nèi)凝集蛋白2(ITLN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Intelectin 2 (ITLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
鋅指同源框蛋白1B(ZFHX1B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Zinc Finger Homeobox Protein 1B (ZFHX1B) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for DnaJ/HSP40 Homolog Subfamily C, Member 12 (DNAJC12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體3DL1(KIR3DL1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Killer Cell Immunoglobulin Like Receptor 3DL1 (KIR3DL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
節(jié)律晝夜蛋白1(PER1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Period Circadian Protein 1 (PER1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Clock同源物(CLOCK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Clock Homolog (CLOCK) 48T/96T Homo sapiens (Human)
轉(zhuǎn)膠蛋白(TAGLN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transgelin (TAGLN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
隱花色素1(CRY1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cryptochrome 1 (CRY1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
配對(duì)框基因9(PAX9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Paired Box Gene 9 (PAX9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
過(guò)氧化還原酶4(PRDX4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Peroxiredoxin 4 (PRDX4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for X-Ray Repair Cross Complementing 6 (XRCC6) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
DNA修復(fù)蛋白R(shí)AD50(RAD50)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for DNA Repair Protein RAD50 (RAD50) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(IREM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Immune Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (IREM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)

MG1655 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BW25113 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BW25113 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
K12 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
K12 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細(xì)胞
ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BL21 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Origami(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Origami(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Origami2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
Origami2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
DH5αλpir 感受態(tài)細(xì)胞OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
TB1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
TB1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞

技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。