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操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證”，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標本時采用無菌試管，經檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標本；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型；
五、性價比非常好，節(jié)省實驗經費。

ILBeta(Interleukin1Beta)ELISAKit小鼠白介素1βCAS:進口、國產規(guī)格：10mg

MSA(mitoticspindleapparatusantibody)ELISAKit人抗紡錘體抗體CAS:76435進口、國產規(guī)格：500mg

MYO/MB(Myoglobin)ELISAKit小鼠肌紅蛋白CAS:749進口、國產規(guī)格：200mg

MIPELISAKit大鼠巨噬細胞炎性蛋白2CAS:11194進口、國產規(guī)格：125mg

AKA(Anti-keratinantibody)ELISAKit人抗角蛋白抗體CAS:進口、國產規(guī)格：200mg

TXB2(ThromboxaneB2)ELISAKit小鼠血栓素B2CAS:進口、國產規(guī)格：ea

MIPBeta/ELC/CCL19ELISAKit大鼠巨噬細胞炎性蛋白3βCAS:進口、國產規(guī)格：ea

MMPELISAkit大鼠基質金屬蛋白酶1CAS:進口、國產規(guī)格：25mg

ACH(acetylcholine)ELISAKit小鼠酰膽CAS:進口、國產規(guī)格：25mg

pANCA(Perinuclearanti-neutrophilcytoplasmicantibody)ELISAKit人抗中性粒細胞核周抗體CAS:980進口、國產規(guī)格：25mg

cANCA(anti-neutrophilcytoplasmicantibody)ELISAKit人抗中性粒細胞胞漿抗體CAS:進口、國產規(guī)格：25mg

MMP0ELISAkit大鼠基質金屬蛋白酶10CAS:719637進口、國產規(guī)格：100mg

LTB4(LeukotrieneB4)ELISAKit小鼠白三B4CAS:719390進口、國產規(guī)格：15mg

aPT1/aPT2(anti-prothrombinsantibodies)ELISAKit人抗凝血素抗體CAS:884953進口、國產規(guī)格：15mg

MMP3ELISAkit大鼠基質金屬蛋白酶13CAS:884953進口、國產規(guī)格：200mg
PAI-1 elisa試劑盒3-(2-羥基基)-2-醛Cell Navigator™ Mitochondrial Staining Kit *Red Fluorescence*PINP骨性酶檢測試盒

3-(4-羥基基)-1-Cell Navigator™ Mitochondrial Staining Kit *Red Fluorescence with 488 nm Excitation*IL-1I型原膠原N端前肽檢測試盒

3,21-二羥基-14-山芝-16-酮Cell Navigator™ Nuclear Staining Kit *Blue Fluorescence*INS白細胞介素1檢測試盒

3,27-二羥基-20(29)-流明-28-酯Cell Navigator™ Nuclear Staining Kit *Green Fluorescence*CRP胰島素檢測試盒

3,3'',4'',5,5'',6,7-六基黃酮Cell Navigator™ Nuclear Staining Kit *Red Fluorescence*PD-1C-反應蛋白檢測試盒

3,4,5-三基酚Cell Navigator™ Nuclear Staining Kit *Red Fluorescence with 488 nm Excitation*RV程序性死亡分子-1檢測試盒

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴 
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。