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使用Coriolis MICRO空氣采樣器結(jié)合基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測(cè)

——推動(dòng)檢測(cè)多種氣傳真菌種類(lèi)的超快速檢測(cè)系統(tǒng)的發(fā)展

氣傳真菌能夠引起一些生物腐蝕和健康問(wèn)題。為了避免這些損害，在一些室內(nèi)環(huán)境例如工廠(chǎng)、博物館和其他一些公共場(chǎng)所檢測(cè)真菌菌落就顯得額外重要。然而目前常規(guī)的一些檢測(cè)真菌的方法需要一個(gè)培養(yǎng)的過(guò)程。

有研究報(bào)道Coriolis® µ有足夠收集能力，通過(guò)PCR擴(kuò)增后，可以有效檢測(cè)單一真菌物種，而且不需要培養(yǎng)的過(guò)程。

本次應(yīng)用中，我們?cè)u(píng)估了一個(gè)超快速檢測(cè)系統(tǒng)，由基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測(cè)系統(tǒng)GENOGATE和Coriolis® µ空氣采樣器組成，用來(lái)檢測(cè)氣傳真菌。

本次應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)材料包括：Coriolis® µ空氣采樣器，無(wú)菌錐形管，15ml收集液體（Bertin公司）；基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測(cè)系統(tǒng)GENOGATE（Toyo Seikan公司）。

本次應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下圖所示：

1.使用Coriolis® µ空氣采樣器收集包括真菌孢子的微粒；

2.篩選真菌孢子并提取DNA；

3.熒光標(biāo)記；

4.使用通用引物進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增；

5.使用相同的引物對(duì)首輪PCR處理的樣品再一次進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增；

6.熒光檢測(cè)分析目的基因。

通過(guò)與ITS序列分析獲得已知的結(jié)果對(duì)比，來(lái)驗(yàn)證本次應(yīng)用中這個(gè)超快速檢測(cè)系統(tǒng)的性能，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：表1為分析基因芯片技術(shù)的檢測(cè)下限，兩輪PCR都檢測(cè)到了不同種類(lèi)的真菌；表2對(duì)比分析了兩種方法，一種為用Coriolis® µ空氣采樣器，用多重PCR分析；第二種為使用air IDEAL采集器收集培養(yǎng)的真菌菌落，然后用ITS序列分析結(jié)果。結(jié)果顯示兩種方法都檢測(cè)到了不同種類(lèi)的真菌，而使用Coriolis® µ和基因芯片分析的方法檢測(cè)到的菌落形成單位都要遠(yuǎn)高于第二種方法，分別為750cfu/62cfu和469cfu/79cfu；使用Coriolis® µ的空氣流速的可達(dá)300L/min，air IDEAL僅100L/min。使用Coriolis® µ空氣采樣器和基因芯片技術(shù)的超快速檢測(cè)系統(tǒng)，不需要培養(yǎng)過(guò)程，成功檢測(cè)到不同種類(lèi)的氣傳真菌。

即使在嚴(yán)重污染的環(huán)境下，結(jié)合Coriolis® µ空氣采樣器和GENOGATE（多重PCR平臺(tái)）可以有效地分析不同種類(lèi)的氣傳真菌。這個(gè)系統(tǒng)在評(píng)估環(huán)境污染、特殊有害真菌檢測(cè)、早期發(fā)現(xiàn)室內(nèi)環(huán)境變化方面是一個(gè)有效的工具，當(dāng)然這個(gè)系統(tǒng)也同樣應(yīng)用于化妝品、食品、飲品行業(yè)以及學(xué)術(shù)研究領(lǐng)域。

Coriolis µ空氣微生物采樣器

>>在液體樣品中采集空氣中的顆粒

>>適用于病毒、細(xì)菌、霉菌、花粉、孢子

>>適合后續(xù)培養(yǎng)和分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法