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Precellys研磨儀:助力水源細(xì)菌污染物的快速定量檢測

閱讀:975        發(fā)布時(shí)間:2020-11-11
 

人類日常接觸到的水源,例如海洋、湖泊、河流等,可能已經(jīng)受到了微生物的污染。歐盟EU和美國環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)EPA都已經(jīng)將腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的含量作為水質(zhì)檢測的指標(biāo)。本篇應(yīng)用中,法國Blue DNA Companion公司根據(jù)EU和EPA的條例,收集了水源之后,推出了一個(gè)總時(shí)間小于3小時(shí),多參數(shù)檢測這兩種微生物的方法。這種快速定量檢測分析是基于RT-PCR這種針對活細(xì)菌的分析方法。其中在細(xì)菌裂解中,用到的是法國Bertin公司的高性能研磨器Precellys Evolution,該方法已經(jīng)被世界著名水務(wù)公司Suez Environment蘇伊士環(huán)境集團(tuán)認(rèn)證。

實(shí)驗(yàn)材料

 

GenoSPYD過濾試劑盒(Blue DNA Compaion公司,法國);

 

Precellys Evolution組織研磨器(Bertin公司,法國);

 

MagSPYD自動化核酸提取平臺(Blue DNA Compaion公司,法國);

 

MIC PCR儀;

 

GenoSPYD針對Enterococcus spp與E.coli的q-PCR定量試劑盒。

 

 

 

實(shí)驗(yàn)程序

 

1.微生物樣品收集:每個(gè)樣品被0.45μm的濾膜過濾。之后將濾膜裝到GenoSPYD裂解管中,并加入1.5mlGenoSPYD細(xì)菌裂解緩沖液;

 

2.將裂解管放入到Precellys Evolution組織研磨器中,研磨程序?yàn)檗D(zhuǎn)速6500rpm、3個(gè)循環(huán)、每個(gè)循環(huán)研磨45s、循環(huán)間歇30s;

 

3.RNA提取:包含RNA的溶菌產(chǎn)物使用GenoSPYD RNA提取試劑盒進(jìn)行純化,可在MagSPYD自動化核酸提取平臺進(jìn)行;

 

4.在MIC PCR儀上進(jìn)行qRT-PCR的檢測。

 

 

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

圖1為對Enterococcus spp檢測的qRT-PCR放大曲線結(jié)果,

表1為水中腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的LOQ(定量檢測限)和LOD(檢測下限)的結(jié)果。

 

 

結(jié)論

 

GenoSPYD自動化產(chǎn)品解決方法配合Precellys組織研磨器可以在3小時(shí)內(nèi)快速檢測和定量活微生物樣本中一些特定如大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、假單胞菌的RNA含量等。此方法的水質(zhì)檢測指標(biāo)可以達(dá)到100CFU,同時(shí)也被世界著名水務(wù)公司Suez Environment蘇伊士環(huán)境集團(tuán)認(rèn)證。

 

細(xì)菌樣本裂解程度直接決定了之后提取RNA的效率,Precellys Evolution研磨儀具備高性能、高效率、安全等特點(diǎn),同時(shí)有冷卻裝置Cryolys Evolution,可使整個(gè)研磨過程的溫度準(zhǔn)確維持在0-10℃,加配無RNA酶的研磨kit,輕松實(shí)現(xiàn)穩(wěn)態(tài)RNA的提取,助力水源中細(xì)菌污染物的快速定量檢測,值得信賴!

 

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