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　　a549細(xì)胞正常狀態(tài)下都呈長梭形,從你提供的細(xì)胞圖片看,圓形細(xì)胞較多,可能是細(xì)胞生長過密,相互擠壓所致!還有許多突起,估計是有其他細(xì)胞污染,或是培養(yǎng)液使用時間過長，有污染所致，建議更換新鮮培養(yǎng)液，用新瓶傳代,密度不要過高!近來關(guān)于細(xì)胞過度傳代的問題也引起了較為普遍的關(guān)注，由于過度傳代造成遺傳性狀的不穩(wěn)定性和一些表型的喪失使得體外生物學(xué)效應(yīng)的偏差也日益增大，因此盡量在購買或者引進(jìn)細(xì)胞株的時候盡量多多凍存低代次的細(xì)胞，以獲得接近原始建株細(xì)胞的生物學(xué)特性。

　　a549細(xì)胞凍存方式：

　　1．將細(xì)胞消化下來，移入離心管離心，棄上清；

　　2．準(zhǔn)備凍存液比例：50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO（現(xiàn)用現(xiàn)配）；

　　3.加1.5凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)。

　　放入-20度冰箱2-4小時后．再放入-80度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存。

　　A549細(xì)胞人肺癌細(xì)胞系常見的污染如下：

　　1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。

　　2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，

　　用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

　　3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

　　4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細(xì)胞還是可以用的。

　　5、真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。