質粒菌株庫常用菌株—覽表以及質粒菌株庫pMAL純化系統(tǒng)，融合蛋白的表達水平主要受目的蛋白影響、密碼子不適、疏水性強、mRNA降解、或由于蛋白錯誤折疊而水解都可能造成表達水平低，可嘗試不同的生長和表達條件來提高融合蛋白的表達量，低溫誘導可降低包含體的形成及避免水解;運用最適密碼子可提高表達;也可能由于目的蛋白對宿主細胞有毒性而使克隆不穩(wěn)定。
質粒菌株庫常用菌株—覽表
BL21(DE3）該菌株用于高效表達克隆于有T7噬菌體啟動子的表達載體的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。天然缺失外膜蛋白酶ompT和ATP依賴的蛋白酶Lon (La)，利于異源蛋白的表達。在培養(yǎng)皿上的生長時間約為10小時左右。ER2566該菌株用于高效表達克隆于有T7噬菌體啟動子的表達載體的基因。在培養(yǎng)皿上的生長時間約為10小時左右。
DH5a一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其80lacZIM15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，即可以用于藍白斑顯示。該菌株也缺失多種蛋白酶，在培養(yǎng)皿上的生長時間約為12小時左右。
JM101一種可支持帶有琥珀突變的載體生長的宿主菌，在培養(yǎng)皿上的生長時間約為10小時左右。
JM109一種帶有琥珀突變的載體生長的重組缺陷的抑制型菌株，對轉染的DNA有修飾作用但無限制作用，在培養(yǎng)上的生長時間約為10小時左右。
HB101一種通常用于大規(guī)模制備質粒的抑制型菌株，它是一種轉化效率很高的大腸桿菌K12×大腸桿菌B的雜交菌株,在培養(yǎng)皿上的生長時間約為10小時左右。
常用原核表達質粒一覽表
質粒名稱pRSET p24B11 pTYB pGEX pET pTRX-Fus pBV pMAL實驗室系列數31462122啟動子T7T7T7 PtacT7 PLPL Ptac大小(Kb)2.95.47.34.94.73.5/6.7抗性標記Ap Kan ApAp Kan ApAp Ap融合蛋白大小(kD)3-5 kD 0-1 kD 55 kD 26 kD 3-4 kD 11 kD/43 kD誘導物IPTG IPTG IPTG IPTG IPTG Trp 420C IPTG
如何提高目的蛋白在大腸桿菌中的表達量及可溶性表達?如何防止目的蛋白的降解?
融合蛋白的表達水平主要受目的蛋白影響、密碼子不適、疏水性強、mRNA降解、或由于蛋白錯誤折疊而水解都可能造成表達水平低，可嘗試不同的生長和表達條件來提高融合蛋白的表達量，低溫誘導可降低包含體的形成及避免水解;運用最適密碼子可提高表達;也可能由于目的蛋白對宿主細胞有毒性而使克隆不穩(wěn)定。故表達時可利用豐富的培養(yǎng)基、新鮮的單菌落、低溫誘導、低濃度的IPTG、減少誘導時間等條件來提高蛋白及可溶性蛋白的產量。蛋白酶抑制劑，蛋白酶缺陷的工程菌或者低溫誘導可防止目的蛋白降解，純化時為防止降解可使用變性條件，如6M脲等。
質粒菌株庫pMAL純化系統(tǒng)
pMAL-p2為分泌型表達載體，表達的融合蛋白分布于大腸桿菌外周腔，用冷滲透法即可獲得較純的融合蛋白。pMAL-c2表達的可溶性融合蛋白多位于大腸桿菌細胞質中，可按常規(guī)方法進行純化。二者均為Ptac啟動子，大小約為6.7Kb，不同的是pMAL-c2無malE信號序列。
大腸編輯質粒 pRE112/X7213
大腸編輯質粒 pKD46
大腸編輯質粒 pCP20
大腸編輯質粒 大腸Cas9質粒 pwtCas9-bacteria #44250
大腸編輯質粒 大腸Cas9質粒 pC001-huLshC2C2-MBP 79150
大腸編輯質粒 大腸Cas9質粒 pCas9 #42876
大腸編輯質粒 大腸Cas9質粒 pCAS #62225
大腸編輯質粒 pCAS配套質粒 pTargetF #62226
大腸編輯質粒 大腸Cas9質粒 pCRISPR #42875
哺乳編輯質粒
哺乳編輯質粒 pX260 #42229
哺乳編輯質粒 pX330 #42230
哺乳編輯質粒 pX335 #42335
哺乳編輯質粒 pX458 #48138
哺乳編輯質粒 pX459 #48139
哺乳編輯質粒 pX458M（+EZ-GuideXH）
哺乳編輯質粒 pX459M（+EZ-GuideXH）
EZ-GuideXH
哺乳編輯質粒 pX461 #48140
哺乳編輯質粒 pX552 #60958
哺乳編輯質粒 pX601 #61591
哺乳編輯質粒 pX602 #61593
哺乳編輯質粒 LentiCRISPR V2 #52961
哺乳編輯質粒 pLenti dCasVP64-Blast #61425
哺乳編輯質粒 pDD162 (Peft-3::Cas9 + Empty sgRNA) #47549
哺乳編輯質粒 pmCherry-C1-EGFP（CRISPR驗證質粒）
哺乳編輯質粒 pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1) #69982
哺乳編輯質粒 addgene53189 ph7SK-gRNA
哺乳編輯質粒 pJ23sgRNA-eGFP 3
編輯質粒 酵母 Cas9-NAT酵母 #64329
編輯質粒 酵母 Cas9-NAT-kan酵母
編輯質粒 pdCas9-Tet1-CD #83340
哺乳報告基因質粒 pGL3-Basic
哺乳報告基因質粒 pGL3-Promoter
哺乳報告基因質粒 pGL3-enhancer
哺乳報告基因質粒 pGL3-Control
哺乳報告基因質粒 pRL-TK
哺乳報告基因質粒 pRL-SV40
哺乳報告基因質粒 pGL4.10[luc2]
哺乳報告基因質粒 pGL4.18[luc2PNeo]
自噬相關質粒 ptfhLC3B人
自噬相關質粒 ptfLC3大鼠
自噬相關質粒 HH-plasmid A1 pCDNA3.1(+)-3HA-hLC3B人
自噬相關質粒 慢病毒 plvx-GFP-LC3人
自噬相關質粒 HH-plasmid A1 pCDNA3.1(+)-hLC3B人
自噬相關質粒 pEGFP-LC3人
自噬相關質粒
自噬相關質粒
哺乳表達質粒 pCDNA3.0
哺乳表達質粒 pIRES2-zsGreen1
哺乳表達質粒 pTRACER-CMV3
哺乳表達質粒 pVAX1
哺乳表達質粒 pCEP4
哺乳表達質粒 pCEP4-CAT
哺乳表達質粒 pBudCE4.1
哺乳表達質粒 pBudCE4.1/lacZ/CAT
哺乳表達質粒 pTagBFP-N vector
哺乳表達質粒 p3XFLAG-CMV-7.1
哺乳表達質粒 pCS2 Notch1 Full Length-6MT（Plasmid #41728）
哺乳表達質粒 pMy-BirA-T2A-eGFP
哺乳表達質粒 熒光共振能量轉移 pBIFC-bFosVC155
哺乳表達質粒 熒光共振能量轉移 pBIFC-bJunVN173
哺乳表達質粒 熒光共振能量轉移 pBIFC-VC155
哺乳表達質粒 pBIFC-CC155
哺乳表達質粒 細胞自噬 pEGFP-LC3人
哺乳表達質粒 pCI-neo-GFP
哺乳表達質粒 pEYFP-Actin
哺乳表達質粒 FLAG-CMV-6a
哺乳表達質粒 pDsReD1-C1
大腸表達質粒 pGEX-4T-2
大腸表達質粒 pGEX-4T-3
大腸表達質粒 pKK233-2
大腸表達質粒 pSR43.6r
大腸表達質粒 pWUR702 53079
逆轉錄類質粒 逆病毒載體 pBABE-HA-puro
逆轉錄類質粒 逆病毒載體，熒光素酶 pBABE-LUC+
逆轉錄類質粒 逆轉錄病毒載體，LCNRNA LZRS-HOTAIR
逆轉錄類質粒 逆轉錄病毒載體，對照 LZRS-control
逆轉錄類質粒 逆轉錄病毒載體 pLEGFP-N1
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