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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)是為了什么?

時(shí)間:2022/1/11閱讀:2605
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  原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究,經(jīng)過長(zhǎng)期的嘗試,我們實(shí)驗(yàn)室找到了一些行之有效的方法,積累了一些經(jīng)驗(yàn)??偨Y(jié)如下:
  1、細(xì)胞分散和接種均勻度
  分離出來的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊,因此,在差動(dòng)貼壁前后,應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次,形成單一分散狀態(tài)。接種后,心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外,將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后,用滴管輕輕吹每個(gè)孔中心部分2~3次,但要特別注意避免污染。

 

原代心肌細(xì)胞間
 

 

  2、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類型的選擇
  成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間更容易貼壁,具有分裂和增殖的能力。差異粘附后,少量成纖維細(xì)胞仍混合在心肌細(xì)胞中。如果處理不當(dāng),它們很容易長(zhǎng)成優(yōu)勢(shì)細(xì)胞溴脫氧尿苷(BrdU)會(huì)干擾細(xì)胞有絲分裂,因此BrdU通常用于抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),但如果使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,則很難BrdU*抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),因?yàn)樘ヅQ逯泻性S多促有絲分裂因子,使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象,獲得90%以上的心肌細(xì)胞。
  3、換液時(shí)間
  觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時(shí),接種密度低,貼壁心肌細(xì)胞數(shù)減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細(xì)胞,接種后48小時(shí)應(yīng)更換溶液,這樣不僅貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量明顯增加,而且BrdU的作用時(shí)間更長(zhǎng),對(duì)成纖維細(xì)胞的抑制作用更明確此外,其與0.1g?L1BSA對(duì)心肌細(xì)胞黏附率和凋亡率無(wú)顯著影響。
  4、防污染措施
  除無(wú)菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外,還應(yīng)特別注意以下幾點(diǎn):(1)取心時(shí)避免切開消化道較安全的方法是切入劍突上肋,不涉及腹腔,減少污染機(jī)會(huì)(2)條件允許的情況下,新生大鼠心肌細(xì)胞不應(yīng)與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng),以防止交叉污染(3)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的觀察和拍照每次時(shí)間過長(zhǎng),否則不僅會(huì)改變培養(yǎng)基的pH值,還會(huì)增加污染的概率。
 
 

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