欧美国产日韩在线免费观看-欧美日韩成人激情一区二区-欧美久久综合一区二区-亚洲av寂寞少妇久久

1） 培養(yǎng)基條件：RPMI-1640培養(yǎng)基+優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%+谷氨酰胺2mM+雙抗1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣95%+二氧化碳5%；溫度：37攝氏度；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%。
3） 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮中保存。

細胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

注意：a) 該細胞貼壁較慢，建議復(fù)蘇、傳代后讓細胞貼壁48-72h后再進行后續(xù)實驗操作。 b) 使用0.25%(w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA消化細胞。 c) MCF7是一種生長緩慢的細胞系，它會以松散的三維團簇的形式出現(xiàn)，并伴有一些漂浮的活細胞。懸浮的活細胞可以通過離心后重新加入到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。在復(fù)蘇后前二代該細胞會出現(xiàn)貼壁緩慢的情況，是正?，F(xiàn)象。松散的三維團簇細胞慢慢會擴散形成一個扁平的單層細胞。如果生長速度比正常情況慢，可以嘗試另一批FBS（即血清批次的促生長能力可能不同）。此外，將血清濃度增加到20％也可能有助于改善生長。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1：2~3比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5. 建議客戶收到細胞后，前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

6. 該細胞僅供科研使用。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類齊全的細胞系和多種原代細胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新，科學(xué)嚴謹"的理念，我們以高標準塑造行業(yè)品牌，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū)，與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場聲譽和廣泛的認可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！

細胞系(帶STR鑒定) | 原代細胞 | 細胞培養(yǎng)基 | 血清 | 細胞培養(yǎng)添加因子 | 標記細胞 | 耐藥細胞 | 生化檢測試劑盒 | WB試劑 | 抗體 等；ATAC-seq分析 | ChIP-seq分析 | 16S rRNA測序分析 | Pull down實驗 | RIP 實驗 | ChIP實驗 | Co-IP實驗 | 質(zhì)譜檢測 | WB檢測 | PCR檢測 | 細胞培養(yǎng)/增殖/凋亡/周期/遷移/侵襲/自噬 | 活體成像 | 免疫組化 | 電鏡檢測 | micro-CT 檢測  等。更多信息，歡迎垂詢上海昆盟生物科技有限公司。