基因電轉(zhuǎn)染是一種利用電場將DNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)細(xì)胞的技術(shù)。主要優(yōu)點是其高效性,它可以將DNA轉(zhuǎn)移到高達90%的細(xì)胞中,而通過病毒載體進行的轉(zhuǎn)染通常只能達到60-80%的轉(zhuǎn)染效率。此外,電轉(zhuǎn)染通常較為經(jīng)濟實用,因為它在控制條件下可重復(fù)使用。相對于其他轉(zhuǎn)染技術(shù),基因電轉(zhuǎn)染儀的構(gòu)造格式也更為簡單。然而,電轉(zhuǎn)染也存在一些局限性。它通常僅適用于較小的DNA分子,因為較大的分子難以穿過細(xì)胞膜。此外,該過程可能會對細(xì)胞產(chǎn)生短暫的傷害,不過這種瞬時傷害是可恢復(fù)的。在使用電轉(zhuǎn)染進行基因編輯及遺傳轉(zhuǎn)變等應(yīng)用中,仍需要仔細(xì)控制實驗條件,以避免任何異常的結(jié)果。
基因電轉(zhuǎn)染儀進行電轉(zhuǎn)染通常涉及的三個基本步驟:
1.制備DNA-所需的DNA必須被放置在適當(dāng)?shù)木彌_液中。緩沖液必須維護DNA的穩(wěn)定性和松散的亞結(jié)構(gòu),以便DNA能夠成功地穿過目標(biāo)細(xì)胞膜。
2.準(zhǔn)備電極-因為該過程涉及到外加電場,因此需要至少兩個電極(陽極和陰極),以便形成一個穩(wěn)定的電場。將陰極放置在電轉(zhuǎn)染裝置底部的明膠或瓊脂凝膠樣品上,而陽極則通常浸入含緩沖液的樣品中。
3.電轉(zhuǎn)染-將含DNA的溶液添加到樣品中,通常與靶細(xì)胞混合。當(dāng)電場應(yīng)用于樣品時,它將導(dǎo)致目標(biāo)細(xì)胞膜短暫的孔。這使得DNA得以輕松地滲透入細(xì)胞內(nèi)。
基因電轉(zhuǎn)染儀使用注意事項:
1.在實驗前,必須對操作進行深入理解和實驗設(shè)計,避免由于操作不當(dāng)或設(shè)備設(shè)定錯誤而引發(fā)的誤差。
2.制備轉(zhuǎn)染混合液時,應(yīng)根據(jù)實驗需要決定使用的轉(zhuǎn)染試劑類型和量。
3.調(diào)整參數(shù)時需要參照設(shè)備說明書,確保操作正確。任何不當(dāng)操作或設(shè)定都會影響結(jié)果。
4.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞在培養(yǎng)中一定要做到規(guī)范化,避免任何不必要的突變或污染,影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。