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一般來說，實時PCR協(xié)議與標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)類似。在生產(chǎn)清潔模板、設(shè)計引物、優(yōu)化反應(yīng)條件等方面也有同樣的問題。主要的區(qū)別是加入插層劑，如SYBR綠色或使用熒光引物檢測PCR產(chǎn)物。在典型反應(yīng)中，qPCR產(chǎn)物呈指數(shù)級生成。由于要使足夠的產(chǎn)品易于檢測，需要幾個周期，熒光圖與循環(huán)數(shù)圖顯示出乙狀結(jié)腸的外觀。在后期，反應(yīng)底物逐漸枯竭，qPCR產(chǎn)物不再加倍，曲線開始平坦。熒光量開始迅速增加的曲線上的點，通常是基線上方的一些標(biāo)準(zhǔn)偏差。Ct與模板的曲線呈線性關(guān)系，因此，通過比較多個反應(yīng)之間的Ct值，可以計算目標(biāo)核酸的濃度。

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