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皖儀科技離子色譜法測(cè)定唾液中的葡萄糖濃度

引言

無(wú)創(chuàng)血糖檢測(cè)一直備受青睞，人唾液具有生物信息豐富、采集安全方便等優(yōu)點(diǎn)，是無(wú)創(chuàng)血糖檢測(cè)的理想媒介。作為血糖標(biāo)志物之一的唾液葡萄糖（唾液糖）因時(shí)效性更強(qiáng)，可反映血糖實(shí)時(shí)信息，受到廣泛研究。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的唾液糖均值明顯高于糖代謝正常人群。當(dāng)唾液糖濃度≥20 mg/L時(shí)，唾液糖與血糖水平呈顯著正相關(guān)，且此時(shí)相關(guān)系數(shù)r最大。

T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)離子色譜法測(cè)定人唾液中的葡萄糖含量。已于2023年10月10日正式實(shí)施。

皖儀開(kāi)發(fā)了一種離子色譜測(cè)試方法檢測(cè)人唾液中的葡萄糖含量，樣品前處理操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確性高，完全滿(mǎn)足T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)在對(duì)人唾液中葡萄糖的測(cè)試要求。

關(guān)鍵詞：離子色譜；食品；葡萄糖；方法學(xué)驗(yàn)證

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1測(cè)試條件

皖儀科技IC6300系列離子色譜儀

儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測(cè)器（Au工作電極）

自動(dòng)進(jìn)樣器：AS2800/AS3110

色譜柱：糖類(lèi)專(zhuān)用色譜柱（4.0mm×250mm）；

保護(hù)柱：糖類(lèi)專(zhuān)用保護(hù)柱（30 mm×4 mm）；

柱溫：30℃；

流速：0.45ml/min；

進(jìn)樣量：250μL；

檢測(cè)模式：脈沖積分

1.2 使用試劑

淋洗液：A:超純水 B：100mM NaOH  C:50mM NaOH+125mM CH3COONa

標(biāo)樣：葡萄糖：純度≥99％或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

樣品：人唾液

1.3樣品制備

刺激性唾液收集：采集時(shí)將采集管中的棉棒放入口中咀嚼3~5min，待唾液浸潤(rùn)棉棒后，把棉棒放回唾液收集管，離子（4000r/min，10min）取上清液（唾液量≥1mL）。

唾液處理：將收集到的唾液樣本立即置于95℃水溶液中30min后去除，自然冷卻到室溫，經(jīng)臺(tái)式離心機(jī)（4000r/min,10min）離心，取上清液，用孔徑0.22μm的水系濾膜過(guò)濾。最后取適量濾液用水稀釋后（唾液量和稀釋倍數(shù)根據(jù)葡萄糖濃度具體調(diào)節(jié)），上機(jī)檢測(cè)

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1g（精確至0.1mg）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度，配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置于0℃~4℃密封，保存期1個(gè)月。

標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液。現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液。臨用現(xiàn)配。

表1. 標(biāo)準(zhǔn)系列曲線(xiàn)濃度梯度表

2 測(cè)試結(jié)果

2.1 葡萄糖線(xiàn)性測(cè)試結(jié)果

依次移取0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)，按照1.1工作測(cè)試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)譜圖多點(diǎn)重疊圖如圖1，葡萄糖在該色譜條件下線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上，線(xiàn)性良好。

圖1.食品中五種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)重疊色譜圖

表2. 線(xiàn)性方程

2.2 樣品測(cè)試譜圖

在1.1的工作測(cè)試條件下條件下，將人唾液樣品進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)樣品進(jìn)行精密度測(cè)試。樣品重復(fù)性測(cè)試圖譜如圖2所示，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對(duì)稱(chēng)，分離度良好，最終得到樣品中葡萄糖含量6.7052mg/L。

圖2. 樣品重疊譜圖

2.3 樣品精密度測(cè)試結(jié)果

在1.1的工作測(cè)試條件下，再次收集人唾液樣品進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)樣品進(jìn)行精密度測(cè)試，測(cè)試圖譜如圖3所示，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對(duì)稱(chēng)，分離度良好，最終得到復(fù)現(xiàn)樣品中葡萄糖含量12.0558mg/L。

圖3. 樣品復(fù)現(xiàn)測(cè)試重疊譜圖

2.4 檢出限測(cè)試

在空白樣品中加標(biāo)準(zhǔn)溶液2μg/L，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢出限測(cè)定，測(cè)試結(jié)果如圖4所示，其中葡萄糖信噪比為61.607，具體檢出限和定量限如表三所示，低于方法（T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)）中樣品的定量限的0.11μg/L要求；

圖4. 檢出限測(cè)試圖譜

表3. 檢出限與定量限測(cè)定表

2.5 樣品加標(biāo)回收重復(fù)性測(cè)試結(jié)果

分別向樣品加2mg/L、4mg/L、6mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度3個(gè)平行樣品進(jìn)行測(cè)定，其測(cè)定譜圖分別如圖5-7所示，其回收率在96.10％~99.50％。

圖5加標(biāo)2mg/L測(cè)試圖譜

圖6. 加標(biāo)4mg/L測(cè)試圖譜

圖7加標(biāo)6mg/L測(cè)試圖譜

3 總結(jié)

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300對(duì)人唾液中的葡萄糖測(cè)試進(jìn)行系統(tǒng)適用性、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)驗(yàn)證、重復(fù)性驗(yàn)證、加標(biāo)回收率驗(yàn)證。測(cè)試結(jié)果峰形較好，線(xiàn)性良好，重復(fù)性高，靈敏度高，完全滿(mǎn)足T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)對(duì)人唾液中的葡萄糖測(cè)試要求。