蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫"器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。
測定原理：
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二： 液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入1.2mL試劑二充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用；
試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存。
樣品測定的準備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 10 | 10 |
試劑三 | 40 | |
試劑一 | 40 |
混勻，30℃準確水浴30min后，95℃水浴10min
試劑四 | 50 | 50 |
95℃水浴5min左右，冷卻至室溫
蒸餾水 | 400 | 400 |
混勻，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下測定各管
吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需要設(shè)一個對照管。
SS-Ⅰ活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492；x為標準品濃度（μg/mL），y為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V反總：反應體系總體積，0.05mL； V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0006x - 0.0492；x為標準品濃度（μg/mL），y為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W
V反總：反應體系總體積，0.05mL； V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
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