土壤過氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，通過測定與土壤反應后溶液在此波長下吸光度的變化，即可反應S-CAT活性的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體300μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入29.7mL蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）；
試劑三：液體3mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測定前務必準備96孔UV板一塊（UV板不是普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務必使用UV板）。
3、 加樣表
試劑名稱 | 測定管 | 無基質(zhì)管 | 無土管 |
風干土樣（g） | 0.03 | 0.03 | |
試劑一（μL） | 260 | 260 | |
蒸餾水（μL） | 260 |
25℃振蕩培養(yǎng) 20min
試劑二（μL） | 10 | 10 | 10 |
混勻8000g，25℃離心5min，取180uL上清
試劑三（μL） | 20 | 20 | 20 |
混勻， 240nm處記錄各管吸光值A。
注意：每個測定管要設(shè)一個無基質(zhì)管，無土管只要做一管。
S-CAT活性計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g風干土樣催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A無土管-A測定管+A無基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A無土管-A測定管+A無基質(zhì)管）
V反總：反應體系總體積，3×10-4 L；ε：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應時間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。
b. 用96孔板測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g風干土樣催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A無土管-A測定管+A無基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×106]÷W÷T=33×（A無土管－A測定管+A無基質(zhì)管）
V反總：反應體系總體積，3×10-4 L；ε：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm； T：反應時間，20 min=1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。
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