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MN9D小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

閱讀：1524      發(fā)布時間：2022-5-7
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MN9D小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞別名：MN9D細(xì)胞，小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞，培養(yǎng)環(huán)境：空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%。
細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：
1.吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞；
2.吸干凈PBS后
加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
（細(xì)胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細(xì)胞*漂浮?；靹蚣?xì)胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3.加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；
4.將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
注意事項：不同品牌胰-酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

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