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微柱液相色譜法的優(yōu)點和缺點
色譜柱由常規(guī)柱轉為微柱后,隨著柱內徑的減少,液相色譜法分析呈現(xiàn)出以下一些優(yōu)點:
1 可分析極少量的樣品,特別適用于分析貴重樣品和從活體采集具有生物活性的樣品。
2 色譜柱中填充固定相的用量大大縮減,僅為常規(guī)的液相色譜儀的1%~10%,簡化了填充方法,不僅降低了分析成本,也便于選擇和更換固定相。
3 分析中流動相用量也大大減少,僅為常規(guī)的液相色譜儀的1%~10%,流動相對環(huán)境的污染減少,有利于保護環(huán)境。
4 微柱隨內徑的減小,縮減了固定相的用量,減少了柱阻力,使輸送流動相的壓力降低,不僅可使得分析時間縮短,還大大提高了柱效,可達10萬~30萬塊/m塔板理論數(shù)。
5 通過微柱的流動相使用了很低流量,因此微柱GPLC易與質譜或核磁共振波譜構成聯(lián)用系統(tǒng),也易與其他HPLC柱組成二維HPLC偶聯(lián)體系。
與上述諸多優(yōu)點相對應,微柱液相色譜在使用發(fā)展過程,也表現(xiàn)出一些不足之處,它們也是實現(xiàn)微柱液相色譜理想分離結果所必須解決的關鍵技術問題,可歸納為:
1 微柱液相色譜喪失了常規(guī)柱具有的“無限直徑“效應而保持高柱效的優(yōu)勢,并突出了柱外效應對降低柱效的影響。
2 由于微柱對樣品容量的降低,使得常規(guī)液相色譜進樣技術的應用受到限制。
3 由于進樣量的減小,樣品從微柱洗脫出的濃度很小,需使用高靈敏度檢測器進行檢測。
4 制作微柱的成本雖然降低,但制作一根高柱效、高選擇性的微柱,仍需要較高的實驗技能。
5 由于微柱的流動相僅使用每分鐘幾至幾十微升的流量,需使用高精度、穩(wěn)定性好、低流量的新型高壓輸液泵。