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KU-55933

MCE 國(guó)際站：KU-55933

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-12016

CAS：587871-26-9

純度：99.92%

存儲(chǔ)條件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶劑中 -80°C 1 年 -20°C 6 個(gè)月

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：KU-55933 是有效的 ATM 抑制劑，IC50 和 Ki 值分別為 12.9 和 2.2 nM；對(duì) ATM 的選擇性比對(duì) DNA-PK，PI3K/PI4K，ATR 和 mTOR 高。

生物活性：KU-55933 是一種有效的 ATM 抑制劑，具有 IC₅₀ 和 K_i分別為 12.9 和 2.2 nM，與 DNA-PK、PI3K/PI4K、ATR 和 mTOR 相比，對(duì) ATM 具有高選擇性。 IC50 和目標(biāo)：IC50：12.9 nM (ATM)^[1] 體外： KU-55933 (10 μM) 阻斷電離輻射-誘導(dǎo) p53 絲氨酸 15 磷酸化。 KU-55933 在抑制這種 ATM 依賴性磷酸化事件方面具有劑量依賴性作用，估計(jì) IC₅₀ 為 300 nM。 KU-55933 消除電離輻射誘導(dǎo)的這些 ATM 底物的磷酸化。 KU-55933 特異性抑制 ATM，但不抑制其他 DNA 損傷激活的 PIKK、ATR 和 DNA-PK^[1]。 KU-55933 誘導(dǎo) pATM、p53、E2F1 和 pATR，在 0.5 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)顯著上調(diào) E2F1 的核部分^[2]。二甲雙胍增加 ATM 和 AMPK 磷酸化，以及原代肝細(xì)胞中的 SHP 蛋白水平，二甲雙胍的這種刺激作用被特定的 ATM 激酶抑制劑 KU-55933^[3] 抑制。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將 1BR 或 AT4 細(xì)胞接種于 10 厘米培養(yǎng)皿中，并在第 2 天進(jìn)行處理（80% 至 90% 匯合度）。將細(xì)胞與 KU-55933 或載體對(duì)照預(yù)孵育 1 小時(shí)，然后暴露于 5 Gy 電離輻射。進(jìn)行細(xì)胞周期分布的時(shí)間過程，并將群體區(qū)分的最佳時(shí)間選為 16 小時(shí)。所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在 16 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案用碘化丙啶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并使用 FACScalibur 通過 FACS 進(jìn)行分析。將 60 毫米培養(yǎng)皿中的指數(shù)生長(zhǎng)（50-70% 匯合度）SW620 細(xì)胞暴露于 KU-55933 或 DMSO 1 小時(shí)，然后加入依托泊苷（最終濃度為 0.1 和 1 μM）16 小時(shí)，然后收獲、碘化丙啶染色和分析如上所述。 MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：用于體外測(cè)定的 ATM 是通過在含有 25 mM HEPES（pH 7.4）、2 mM MgCl2、250 mM KCl、500 μM EDTA、100 μM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.1% v/v Igepal 的緩沖液中用兔多克隆抗血清進(jìn)行免疫沉淀而獲得的，該抗血清針對(duì) ATM 的 COOH 末端 400 個(gè)氨基酸。將 ATM-抗體復(fù)合物與蛋白 A-Sepharose 珠一起孵育 1 小時(shí)，然后通過離心回收珠子，從核提取物中分離出 ATM-抗體復(fù)合物。在 96 孔板的孔中，將含有 ATM 的 Sepharose 珠子與 1 μg 底物谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶-p53N66（與谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶融合的 p53 的 NH2 末端 66 個(gè)氨基酸）在 ATM 測(cè)定緩沖液 [25 mM HEPES（pH 7.4）、75 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM Na3VO4、500 μM DTT 和 5% v/v 甘油] 中在有或無(wú)抑制劑的情況下在 37°C 下孵育。輕輕搖動(dòng) 10 分鐘后，加入 ATP 至最終濃度為 50 μM，并在 37°C 下繼續(xù)反應(yīng) 1 小時(shí)。將板以 250×g 離心 10 分鐘（4°C）以除去含有 ATM 的珠子，并除去上清液并轉(zhuǎn)移至白色不透明 96 孔板中，在室溫下孵育 1.5 小時(shí)以允許谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶-p53N66 結(jié)合。然后用 PBS 清洗該板，吸干，并通過標(biāo)準(zhǔn) ELISA 技術(shù)用磷酸化絲氨酸 15 p53 抗體進(jìn)行分析。磷酸化谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶-p53N66 底物的檢測(cè)與山羊抗鼠辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗結(jié)合進(jìn)行。增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光溶液用于產(chǎn)生信號(hào)，并通過 TopCount 平板讀數(shù)器進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

IC50 & Target：ATM 12.9 nM (IC50) DNA-PK 2500 nM (IC50) mTOR 9300 nM (IC50) PI3K 16600 nM (IC50)

熱-銷產(chǎn)品：Val-Cit-PAB-MMAE  | Navitoclax  | Acetylcysteine  | Streptozotocin  | Nusinersen

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Hickson I, et al. Identification and characterization of a novel and specific inhibitor of the ataxia-telangiectasia mutated kinase ATM. Cancer Res. 2004 Dec 15;64(24):9152-9
[2]. Khalil HS, et al. Pharmacological inhibition of ATM by KU55933 stimulates ATM transcription.Exp Biol Med (Maywood). 2012 Jun;237(6):622-34. Epub 2012 Jun 22.
[3]. Kim YD, et al. Orphan nuclear receptor SHP negatively regulates growth hormone-mediated induction of hepatic gluconeogenesis through inhibition of STAT5 transactivation.J Biol Chem. 2012 Sep 12.