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此文詳細(xì)講述了倒置熒光顯微鏡的應(yīng)用原理
閱讀：885 發(fā)布時間：2023-10-26
倒置顯微鏡是為了適應(yīng)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的組織培養(yǎng)、細(xì)胞離體培養(yǎng)、浮游生物、環(huán)境保護(hù)、食品檢驗等顯微觀察。由于這些活體被檢物體均放置在培養(yǎng)皿(或培養(yǎng)瓶)中，這樣就要求倒置顯微鏡的物鏡和聚光鏡的工作距離很長，能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進(jìn)行顯微觀察和研究。因此，物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來，故稱為“倒置顯微鏡”。
倒置熒光顯微鏡，是指與一般顯微鏡相比，其物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來，由熒光附件與顯微鏡有機結(jié)合構(gòu)成的顯微鏡。激發(fā)光從物鏡向上落射到標(biāo)本表面，被反射到物鏡中并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進(jìn)入物鏡，經(jīng)雙色束分離器使激發(fā)光和熒光分開而成像。物鏡和聚光鏡的工作距離很長，能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進(jìn)行顯微觀察和研究。適用于土壤微生物培養(yǎng)實驗，具有在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行顯微觀察的特點，可以觀察不經(jīng)染色的透明活體。特別適用于對活體細(xì)胞和細(xì)胞離體培養(yǎng)等顯微觀察。
倒置熒光顯微鏡是激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面，即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器，它與光軸呈45°角，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進(jìn)入物鏡，反回到雙色束分離器，使激發(fā)光和熒光分開，殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊，可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻，成像清晰，放大倍數(shù)愈大熒光愈強。
倒置熒光顯微鏡適用于對活體細(xì)胞和組織、流質(zhì)、沉淀物等進(jìn)行顯微研究，是生物學(xué)，細(xì)胞學(xué)，腫瘤學(xué)，遺傳學(xué)，免疫學(xué)等研究工作的**儀器?？晒┛蒲小⒏咝?、醫(yī)療、防疫和農(nóng)牧等部門使用。倒置熒光顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光顯微鏡組成。儀器配有長工作距離平場消色差物鏡、大視野目鏡、雙目觀察，倒置顯微鏡還配有特長或超長工作距離聚光鏡，同時配有相襯裝置及長工作距離平場相襯物鏡。