貨號(hào)： HG-CL100

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒用于生物制品樣本前處理，精準(zhǔn)抽提各種生物制品中宿主細(xì)胞殘DNA 。本試劑盒適用于多種基質(zhì)緩沖溶液， 有效提取純化微量的DNA?？膳c譜新生物宿主細(xì)胞（CHO、E.coli、Vero、Human、質(zhì)粒、SV40LTA &EI A等）DNA（qPCR）檢測(cè)試劑盒配合使用。

規(guī)格：

100 人份

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期：

規(guī)定儲(chǔ)存條件下12個(gè)月。

本試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)材料：

無(wú)水乙醇（分析純）、1×PBS 緩沖液（無(wú)Mg 2+ 和Ca 2+，除菌過濾）、異丙醇（分析純）
渦旋儀、磁力架、離心機(jī)、水浴鍋/金屬浴、移液器
1.5mL 無(wú)菌低吸附離心管、低吸附吸頭、一次性手套

試驗(yàn)流程：

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1、每次試驗(yàn)需要在干凈的試劑瓶中用無(wú)水乙醇和滅菌過的超純水配制成新鮮的80%乙醇。
2、單個(gè)樣本的結(jié)合液的準(zhǔn)備：9 μL糖原+0 .2 μL酵母tRNA（如果提取酵母DNA，結(jié)合液中不加酵母tRNA）。
注：?jiǎn)未挝毫坎簧儆?μL。
3、洗滌液準(zhǔn)備：洗滌液使用前加30mL的無(wú)水乙醇，充分混勻后使用，同時(shí)做好標(biāo)記，每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持瓶中的無(wú)水乙醇含量。

樣本準(zhǔn)備

1、樣本稀釋：如果待檢測(cè)樣本是生物制品純化過程中的上游中間樣本，可能含有較高的DNA含量。為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，使樣本的檢測(cè)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)，可以用1× PBS對(duì)高DNA含量樣本進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋后再進(jìn)行樣本提取， 一般可考慮將高DNA含量樣本稀釋100倍或1000倍。 

2、干粉樣本：一般可考慮將干粉樣本稀釋成10mg /mL或100mg/mL，再進(jìn)行提取操作。 

3、pH值要求：使用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整樣品的pH至中性（pH6. 0~ 8 .0）進(jìn)行提取。 

4、平行處理：每個(gè)樣本建議進(jìn)行三次DNA提取處理。 

5、樣品加標(biāo)：待處理樣品的DNA加標(biāo)濃度為樣品核酸濃度的2- 10倍為宜，建議樣品加標(biāo)體積不超過待處理樣本體積的1/10。 

6、陰性對(duì)照：每次試驗(yàn)需用無(wú)模板稀釋液（1× PBS）與待測(cè)樣本一同處理。

操作流程：

1、每個(gè)待處理樣本取100 μL于1.5 mL離心管中， 待進(jìn)一步提取。 

2、每個(gè)100μL樣本中加入25 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋震蕩30 s，瞬時(shí)離心，65 ℃孵育15 min 。

提取步驟：

1、孵育完成后將離心管瞬時(shí)離心，之后依次加入9.2 μL結(jié)合液、50 μL裂解液和150 μL異丙醇，20 μL磁珠（磁珠使用前需充分混勻，確保每次加入的磁珠量均一致，以免造成DNA得率不一致），渦旋振蕩5min，快速離心10 s 。 

2、將離心管置于磁力架，輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后，保持離心管固定于磁力架上，用移液槍吸去上清，注意不要觸碰磁珠。

3、加入500μL洗滌液（ 使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），渦旋振蕩30 s，確保磁珠分散，離心管壁無(wú)聚集磁珠?？焖匐x心10s后將離心管重新置于磁力架上輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后，靜置1 min，用移液器小心吸去上清。 

4、加入500μL新鮮配制的80 %乙醇，渦旋振蕩30 s，確保磁珠分散，離心管壁無(wú)聚集磁珠?？焖匐x心10 s 后將離心管重新置于磁力架上輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后，靜置1 min，用移液器小心吸去上清。 

5、為保證盡量吸出殘留乙醇，可將離心管快速離心10s后，置于磁力架上用10μL移液器吸出殘留乙醇。 

6、打開管蓋室溫（18-25℃）干燥3- 5min（干燥時(shí)間依具體情況進(jìn)行延長(zhǎng)或縮短；肉眼隨時(shí)注意觀察，避免磁珠過分干燥）。注： 干燥過程中磁珠過干或有乙醇?xì)埩舳紩?huì)影響樣本回收率。干燥也可選擇鼓風(fēng)干燥，一般建議鼓風(fēng)干燥2min。 

7、將離心管從磁力架取下，每管加入100μL 洗脫液，渦旋振蕩1min，70℃孵育7min，期間每2-3 min渦旋混勻一次。 

8、 孵育完成后，將離心管高速離心1min，然后靜置于磁力架上，待磁珠分離后，用移液器小心轉(zhuǎn)移上清到新的1.5 mL 離心管中。

注意事項(xiàng)：

1、實(shí)驗(yàn)開始前，為減少污染建議用酒精擦拭臺(tái)面、移液器、槍頭盒等表面。 

2、注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭，避免交叉污染。 

3、所有試劑需平衡至室溫（18-25℃），再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 

4、在磁珠洗滌或洗脫過程中，每次振蕩混勻后，都要短時(shí)間快速離心，以保證沒有磁珠液附著在離心管管蓋和管壁上。 

5、盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化就立即進(jìn)行后續(xù)DNA檢測(cè)，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 

6、試劑應(yīng)儲(chǔ)存于規(guī)定環(huán)境下，不同批次試劑盒試劑不建議混用。 

7、最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。

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